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總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書

來源:上海研謹生物科技有限公司   2025年07月03日 10:10  

總膽固醇(TC)含量檢測試劑盒說明書

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

規格:100T/96S 產品簡介:

微量法

總膽固醇(Total Cholesterol,TC)是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和,包括游離膽固醇和膽固醇酯。

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉化為 FC;進一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,生成△4-膽甾烯酮和 H2O2;最后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物,其在 500nm 有特征吸收峰,其顏色深淺與TC 含量成正比。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計/酶標儀、天平、低溫臺式離心機、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調式移液槍、

EP 管、蒸餾水、異丙醇。產品內容:

提取液:異丙醇 100mL×1 瓶,自備,4℃保存;

工作液:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

標準品:粉劑×1支,10mg膽固醇,4℃保存。臨用前加入517μL提取液,振蕩溶解,即為50μmol/mL 的膽固醇標準溶液。

操作步驟:

一、樣本處理:

1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL

提取液)進行冰浴勻漿。10000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。

2.細菌、真菌:按照細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 2 秒,間隔 3 秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃離心 10min,取上清置于冰上待測。

3.血清(漿)樣品:直接測定。二、測定步驟:

1、 分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 500nm,蒸餾水調零。

2、 將 50μmol/mL 標準液用提取液稀釋為 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的標準溶液備用。

3、 操作表:(在離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑)

第 1 頁 共 2 頁

測定管標準管空白管

樣品(µL)20--

標準溶液(μL)-20-

提取液(μL)--20

工作液(µL)180180180

充分混勻,37℃靜置 15min,反應完成后測定 500nm 處吸光值 A,分別記為 A 測定管、A 標準管和 A 空白管,△A=A 測定管-A 空白管,△A 標準=A 標準管-A 空白管, 空白管只需測一次。

總膽固醇含量計算

一、標準曲線的繪制:

以各個標準溶液的濃度為 x 軸,其對應的△A 標準為 y 軸,繪制標準曲線,得到標準方程 y=kx+b, 將△A 帶入方程得到 x(μmol/mL)

二、總膽固醇含量的計算:

1.血清(漿)中 FC 含量計算:

TC 含量(μmol/dL)=x×100。

2.組織中 FC 含量計算:

1.按樣本蛋白濃度計算

TC 含量(μmol/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提取)=x÷Cpr。

2.按樣本鮮重計算

TC 含量(μmol/g 鮮重)=x×V 提取÷W= x÷W

3.細胞、細菌中 TC 含量計算:

TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。

100:1dL=100mL;V 提取:加入樣本的提取液體積,1mL;W:樣本質量,g;500:500 萬個細胞數量。

注意事項

當△A 大于 1.5 時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

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實驗技術服務:

 


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