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微生物采樣過程中如何避免交叉污染?

來源:杭州華端生物科技有限公司   2025年06月29日 16:51  
在微生物采樣過程中,交叉污染可能源于設備殘留、人員操作、環(huán)境微生物或樣本間相互污染,需從全流程實施嚴格的防污染措施。以下是分場景的標準化操作指南及技術(shù)要點:
 
一、采樣前的設備與耗材滅菌
 
1.硬件滅菌規(guī)范
 
可重復使用設備:
 
金屬采樣頭(如撞擊式采樣器):121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘(GB/T38512-2020),或使用70%乙醇+火焰灼燒(適用于現(xiàn)場應急處理)。
 
塑料部件(如采樣泵管路):用0.1%過氧乙酸浸泡30分鐘,再用無菌水沖洗3次,晾干后紫外照射(254nm,≥30分鐘)。
 
一次性耗材:
 
培養(yǎng)皿、采樣袋等需選用輻照滅菌產(chǎn)品(鈷-60照射,劑量≥25kGy),拆封前檢查包裝完整性(ISO11607-1標準)。
 
2.滅菌效果驗證
 
每次滅菌后進行生物監(jiān)測:放入嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953孢子條,滅菌后培養(yǎng)(56℃,48小時),菌落數(shù)應為0(GB8599-2021)。
 
二、采樣現(xiàn)場的操作防污染體系
 
1.人員無菌操作準則
 
三級防護要求:
 
普通環(huán)境:穿戴一次性實驗服+醫(yī)用手套(如丁腈手套),采樣前用75%乙醇擦拭手套表面。
 
高風險環(huán)境(如臨床樣本):需穿戴無菌隔離衣+護目鏡+雙層手套,每采樣1次更換外層手套。
 
動作規(guī)范:
 
采樣時手臂避免越過采樣口上方,保持采樣頭距身體≥30cm,呼吸方向與采樣口呈90°夾角。
 
禁止在采樣區(qū)域內(nèi)整理頭發(fā)、觸摸面部,如需調(diào)整設備,需先更換手套或消毒手部。
 
2.空間分區(qū)與氣流控制
 
采樣區(qū)劃分:
 
設置50cm×50cm的無菌操作區(qū),用75%乙醇噴灑桌面形成消毒帶,采樣器放置于區(qū)域中央。
 
高潔凈度場景(如ISO5級潔凈室)需在層流工作臺(風速0.36-0.54m/s)或生物安全柜(BSC-II級)內(nèi)操作。
 
氣流干擾控制:
 
采樣前關(guān)閉門窗,停止空調(diào)系統(tǒng)運行10分鐘(避免氣流攜帶外源微生物),人員走動控制在1米外。
 
三、樣本采集過程的隔離措施
 
1.分批次采樣防交叉方案
 
批次間隔消毒:
 
每完成1個樣本采樣后,用75%乙醇擦拭采樣器外殼、采樣口及操作臺面,作用5分鐘后再進行下一樣本采集。
 
若采集不同類型樣本(如環(huán)境樣本與臨床樣本),需更換全套采樣頭及管路,避免殘留微生物混淆。
 
2.特殊樣本的隔離技術(shù)
 
高濃度樣本處理:
 
處理污水、糞便等高負荷樣本時,使用帶負壓過濾的采樣器(如MilliporeEZ-Pak),采樣后立即密封濾芯,防止氣溶膠擴散。
 
致病菌采樣:
 
采用生物安全型采樣頭(如帶HEPA過濾的閉合式采樣器),采樣后放入防漏金屬罐(內(nèi)層鋪吸水紙+0.5%次氯酸鈉溶液)。

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