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DNA定量分光光度計(jì)對(duì)濃度的測(cè)定判定

來源:上海牧榮生物科技有限公司   2025年06月25日 11:32  
DNA定量分光光度計(jì)是一種基于核酸分子在特定波長(zhǎng)下對(duì)紫外光的吸收特性來測(cè)定DNA濃度的儀器,其濃度測(cè)定判定主要依據(jù)吸光度值(A)及相關(guān)比值,以下為你詳細(xì)介紹:  
濃度測(cè)定原理  
DNA分子中的堿基具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu),在260nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰。根據(jù)朗伯-比爾定律,吸光度與溶液中吸光物質(zhì)的濃度成正比,即A=  
varepsiloncl(其中A為吸光度,  
varepsilon為摩爾吸光系數(shù),c為溶液濃度,l為光程長(zhǎng)度)。通過測(cè)量DNA溶液在260nm處的吸光度,再結(jié)合已知的摩爾吸光系數(shù)和光程長(zhǎng)度,即可計(jì)算出DNA的濃度。  
?比值應(yīng)大于2.0。如果比值低于2.0,可能表示樣品中存在鹽離子、酚、氯仿等雜質(zhì)。  
影響測(cè)定結(jié)果的因素及注意事項(xiàng)  
樣品純度:樣品中的蛋白質(zhì)、RNA、鹽離子、有機(jī)溶劑等雜質(zhì)會(huì)影響吸光度的測(cè)量,從而影響濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性。因此,在測(cè)定前應(yīng)盡量提高DNA樣品的純度。  
樣品稀釋:如果樣品濃度過高,需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尅O♂寱r(shí)應(yīng)使用與測(cè)量時(shí)相同的緩沖液,并且要準(zhǔn)確記錄稀釋倍數(shù)。  
儀器校準(zhǔn):定期對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn),確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。校準(zhǔn)包括波長(zhǎng)校準(zhǔn)和吸光度校準(zhǔn)等。  
測(cè)量環(huán)境:測(cè)量時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光直射和溫度變化過大,以免影響測(cè)量結(jié)果。同時(shí),要保持比色皿的清潔,避免劃痕和污染。

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