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ELISA實驗標本處理方法

來源:常達恩生物科技(上海)有限公司   2025年06月24日 10:49  
一、血清的采集、處理和保存
1.真空采血針采集2ml 新鮮血液,加入無菌試管中。
2.采血后室溫靜置1小時。
3.將采集血液用離心機4℃,2500rpm離心10min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
4.取上清。分裝凍存備用,2-8℃下,可放置保存24-48小時;-20℃下,可放置保存1個月;-70℃下,可放置保存6個月。
5.根據您的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。此外還應避免細菌污染,因為菌體中可能含有含有內源性過氧化物酶,也會產生假陽性反應。血清標本宜在新鮮時檢測。如在冰箱中保存過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。

二、血漿的采集、處理和保存
1.真空采血針采集2ml新鮮血液,加入無菌試管中。
2.按1:9加入抗凝劑(EDTA、草酸鈉、肝素、枸櫞酸鈉),30分鐘內于冰上分離血漿以減少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集)。
3.將采集血液用離心機4℃,2500rpm離心5 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
4.取上清。分裝凍存備用,2-8℃下,可放置保存24-48小時;-20℃下,可放置保存1個月;-70℃下,可放置保存6個月。
5.根據您的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求,建議使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。注意事項:制備血漿標本需借助于抗凝劑EDTA, 抗凝不wan全的標本因纖維蛋白原干擾而造成假陽性。

三、尿液的采集、處理和保存
1.采集尿液樣本500ul加入無菌試管中。
2.將采集血液用離心機4℃,2500rpm離心10 min,將離心好的樣本留上清,棄下面沉淀。 
3.取上清。分裝凍存備用,2-8℃下,可放置保存24-48小時;-20℃下,可放置保存 1 個月;-70℃下,可放置保存6個月。
4.根據您的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。

四、細胞上清液的采集、處理和保存
1.采集細胞培養上清液500ul,加入無菌試管中。
2.將采集血液用離心機 4℃,2500rpm 離心 10 min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。 
3、取上清。分裝凍存備用,2-8℃下,可放置保存24-48小時;-20℃下,可放置保存1個月;-70℃下,可放置保存6個月。
4.根據您的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。

五、各類組織勻漿的采集、處理和保存
1.采集組織,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,剔除附屬的結締組 織,稱取組織塊。
2.用移液管量取0.1M PBS或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應 該是組織塊重量的9倍,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。
3.勻漿的方式有多種: 
a) 手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6~8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。 
b) 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000r/min 上下研磨制成10%組織勻漿,也可用 內切式組織勻漿機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續3~5 次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
4.將制備好的10%勻漿用離心機4℃,3000rpm離心15min,將離心好的勻漿留上清,棄下面沉淀。
5.取上清。分裝凍存備用,2-8℃下,可放置保存24-48小時;-20℃下,可放置保存1個月;-70℃下,可放置保存6個月。
6.根據您的實驗需要,取適量上清夜進行各種ELISA測定。


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