一、48道基因合成儀設(shè)備相關(guān)誤差:
1. 加樣系統(tǒng)誤差
移液精度波動:
不同通道的移液泵或閥可能存在差異,導(dǎo)致加樣量不一致(如堿基單體分配不均)。
長期使用后,移液部件磨損或堵塞,造成體積偏差。
交叉污染:
通道之間密封性不足,導(dǎo)致液體殘留或揮發(fā)物擴散,引起堿基或酶污染。
2. 溫度控制誤差
反應(yīng)體系溫差:
48通道加熱模塊的溫度均勻性不足,部分孔位溫度偏高或偏低,影響延伸效率。
升溫/降溫速率不一致,導(dǎo)致PCR或連接反應(yīng)不同步。
熱蓋壓力不均:
熱蓋與反應(yīng)板接觸不緊密,部分孔蒸發(fā)嚴重,改變反應(yīng)體系體積。
3. 檢測系統(tǒng)誤差
熒光/吸光度檢測偏差:
不同通道的光學(xué)檢測器靈敏度差異,導(dǎo)致對合成效率的判斷失誤。
背景噪聲干擾(如熒光淬滅或散射),影響實時監(jiān)測準確性。
4. 機械故障
磁珠分離或振蕩混勻不均:
磁力模塊磁場強度差異,導(dǎo)致磁珠回收效率不同,影響洗滌或純化效果。
振蕩頻率或時間不一致,導(dǎo)致反應(yīng)混合不充分。
二、48道基因合成儀的操作與流程誤差:
1. 程序設(shè)置錯誤
參數(shù)輸入偏差:
合成周期(如延伸時間、變性溫度)設(shè)置不當,導(dǎo)致片段長度或錯配率升高。
未根據(jù)模板類型(如GC含量高、二級結(jié)構(gòu))調(diào)整參數(shù)。
自動化腳本漏洞:
多步驟程序(如切割、連接、純化)銜接不當,導(dǎo)致反應(yīng)中斷或過度處理。
2. 樣本加載問題
加樣順序或位置錯誤:
人工加樣時未按規(guī)范操作(如未更換槍頭),引入外源DNA污染。
不同通道的起始物料量差異(如引物濃度不同),導(dǎo)致合成效率不均。
3. 純化與回收效率低
磁珠或硅膠膜純化損失:
純化過程中小片段DNA(如短寡核苷酸)吸附損失,降低產(chǎn)量。
洗滌不徹*,殘留鹽或雜質(zhì)抑制后續(xù)反應(yīng)。
相關(guān)產(chǎn)品
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