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Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑轉染raw 264.7細胞流程

來源:上海徠同生物科技有限公司   2025年06月16日 10:31  

Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑轉染raw 264.7細胞流程

 

用試劑轉染raw 264.7細胞怎樣提高轉染效率一直是困擾實驗者的一道難題,特別對于10000左右質粒DNA的轉染更是困難;我們實驗室總結了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉染試劑貨號AD600025轉染raw 264.7細胞一套優化方案希望對大家轉染raw 264.7細胞提高轉染效率有一定的幫助。

下圖是8000bp左右的pEGFP-C16孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑轉染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。

                                             

1.jpg



2.jpg




提高轉染raw 264.7細胞條件如下

一、質粒DNA準備

1、質粒DNA濃度700ng/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內毒素),我用QIAGEN試劑盒除去的內毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養板,細胞匯合度在70%左右,再進行轉染。

2、復合物制備:將質粒DNAZeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600025轉染試劑按照1:112ug:12ul)關系直接混合,用移液器吹吸10-15次混勻,室溫靜止10-15分鐘。

3、將復合物加入wan全培養基的細胞培養板,并輕輕混勻,放入培養箱中繼續培養(不建議把復合物加入到無血清的培養基里面,我后期會進一步摸索此條件)。

4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率

三、注意事項:

1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如:lipo3000,FuGENE 6FuGENE HDEffectene等;

2細胞培養基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

四、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑信息:

產品名稱

貨號

規格

數量

報價

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600500

5ML

1

電詢

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD601000

10ML

1

電詢

五、RAW 264.7細胞簡述:

RAW 264.7小鼠單核巨噬細胞白血病細胞此細胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。

 


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