試劑簡介
Alexa Fluor 405-Streptavidin是一種結合了藍色熒光染料(Alexa Fluor 405)與鏈霉親和素(Streptavidin)的生物偶聯物,應用于生物醫學研究中的熒光標記、檢測和信號放大。
【Alexa Fluor 405的化學性質與光譜特性】
化學結構
Alexa Fluor 405的核心結構包含磺酸基團(-OSO??)、苯環、哌啶環及環己烯酮基團,并通過琥珀酰亞胺酯(NHS ester)實現與蛋白的偶聯。其分子中帶有三個三乙胺(Et?NH?)離子,增強了水溶性和穩定性。
光學特性
激發與發射波長:激發峰(Ex)為400–402 nm,發射峰(Em)為420–424 nm。
摩爾吸收系數:ε = 35,000 L·mol?1·cm?1,表明其吸光能力強。
斯托克斯位移:約20 nm(如Ex 401 nm,Em 422 nm),有助于減少背景干擾。
熒光壽命:約1.6 ns,適合時間分辨熒光檢測。
優勢
相比UV激發的藍色染料(如Cascade Blue),Alexa Fluor 405可在可見光(405 nm激光)下激發,減少自體熒光干擾,信號較亮。
與綠色熒光染料(如FITC)光譜重疊小,適合多色標記實驗。
Streptavidin的結構與特性
四聚體蛋白:分子量約52–66 kDa,由四個相同亞基組成,每個亞基可結合一個生物素分子。
較高親和力:與生物素的解離常數(Kd)為10?1? M,是已知較強的非共價相互作用之一。
穩定性:耐受pH(4–10)、高溫(70℃以下)及有機溶劑,適合多種實驗條件。
【補充信息】
狀態:凍干粉
純度:≥95%
儲存條件:-20℃避光干燥保存,有效期 6 個月。
復溶后溶液:需添加0.2 mM 硫柳汞防腐,4℃避光保存 6 個月;長期儲存建議分裝后-20℃冷凍,避免反復凍融。
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