CHO（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢）細(xì)胞是生物制藥領(lǐng)域廣泛使用的宿主細(xì)胞系，憑借其穩(wěn)定表達(dá)外源蛋白、良好的轉(zhuǎn)染效率以及接近哺乳動(dòng)物細(xì)胞的蛋白質(zhì)翻譯后修飾能力等優(yōu)勢(shì)，在單克隆抗體、重組蛋白藥物等多種生物制品的生產(chǎn)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而，在生物制品的生產(chǎn)過(guò)程中，即使采用嚴(yán)格的純化工藝，仍可能存在CHO殘留DNA，這些殘留DNA可能引發(fā)潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)，如致瘤性、傳染性以及免疫源性等問(wèn)題，因此對(duì)CHO殘留DNA的檢測(cè)和片段分析成為確保生物制品安全性及質(zhì)量可控性的重要環(huán)節(jié)。

世界衛(wèi)生組織（WHO）和各國(guó)藥物注冊(cè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)均對(duì)生物制品中外源宿主DNA殘留制定了相應(yīng)的監(jiān)測(cè)和控制要求。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）現(xiàn)行指導(dǎo)方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，對(duì)于生物制品宿主細(xì)胞DNA殘留DNA量上限為100 pg/劑。歐洲藥典通則規(guī)定生物制品殘留DNA度大多為不超過(guò)10 ng/劑。中國(guó)藥典2020年版三部也明確規(guī)定，以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制劑外源宿主細(xì)胞DNA殘留量不能超過(guò)100 pg/劑。

除需對(duì)DNA的殘留量進(jìn)行嚴(yán)格控制外，殘留DNA片段大小分布同樣是確定其相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素的重要指標(biāo)。研究表明，一個(gè)功能基因至少在 200 bp 以上，因此大于 200 bp 的DNA片段有可能具有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)越高。美國(guó) FDA 在《Chemistry, Manufacturing, and Control (CMC) Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications (INDs)》行業(yè)指南中建議將非致瘤性連續(xù)細(xì)胞的殘留DNA量限制在 10 ng/劑以下，DNA 大小限制在約200 bp以下。

翌圣生物自主研發(fā)的CHO殘留DNA檢測(cè)和片段分析產(chǎn)品，為生物制品生產(chǎn)企業(yè)提供了高效、準(zhǔn)確的CHO殘留DNA質(zhì)控解決方案。該產(chǎn)品采用先進(jìn)的熒光探針 qPCR法原理，經(jīng)過(guò)精心設(shè)計(jì)和驗(yàn)證，能夠滿足生物制藥行業(yè)對(duì)CHO殘留DNA檢測(cè)和片段分析的嚴(yán)格要求。

1、CHO殘留檢測(cè)試劑盒線性范圍為：3fg/μL~300pg/μL；CHO片段分析試劑盒（88 bp、115 bp、229 bp、505 bp）線性范圍均為30fg/μL~300pg/μL。

圖1.CHO擴(kuò)增曲線線性圖譜（左）和88 bp片段擴(kuò)增曲線線性圖譜（右）

2、用背景溶液（高蛋白、高核酸、高鹽、高低PH）對(duì)樣本提取，對(duì)于不同背景溶液的DNA樣本回收率均在70%~130%之間。

表1.CHO殘留DNA檢測(cè)試劑盒模擬樣本加標(biāo)回收

3、CHO宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)試劑盒(3G)的定量限為0.3fg/uL；CHO殘留DNA片段分析試劑盒的四個(gè)片段的定量限均為3fg/μL。

圖2.CHO殘留DNA 0.3fg/μL 檢測(cè)結(jié)果（左）和CHO殘留DNA片段分析88 bp片段3fg/μL檢測(cè)結(jié)果（右）