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Zeta Life Advanced DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑攻克 RAW264.7 細胞轉(zhuǎn)染效率難題

來源:上海徠同生物科技有限公司   2025年06月03日 10:34  

Zeta Life Advanced DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑攻克 RAW264.7 細胞轉(zhuǎn)染效率難題

 

RAW264.7細胞轉(zhuǎn)染效率低怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實驗者的一道難題,特別對于比較大的質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難;我們實驗室用美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD600075轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞整理了一套優(yōu)化方案希望對大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。

 下圖是用美國Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD6001506孔板轉(zhuǎn)8000bp左右的pEGFP-C1rRAW264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。

                                             

1.jpg


提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞條件如下

一、質(zhì)粒DNA準備

1、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素),我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板,細胞匯合度在70%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

2、復(fù)合物制備:將質(zhì)粒DNAZeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600075轉(zhuǎn)染試劑按照1:112ug:12ul)關(guān)系直接混合,用移液器吹吸10-15次混勻,室溫靜止10-15分鐘。

3、將復(fù)合物加入wan全培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板,并輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面,我后期會進一步摸索此條件)。

4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率

三、注意事項:

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如:lipo3000,FuGENE 6FuGENE HDEffectene等;

2細胞培養(yǎng)基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

四、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息:

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

數(shù)量

報價

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD600500

5ML

1

電詢

Advanced DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑

AD601000

10ML

1

電詢

 


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