基于已知對泛素具有親和力的蛋白質結構域，串聯泛素結合實體（Tandem Ubiquitin Binding Entities，TUBEs）已被開發用于分離和鑒定泛素化蛋白。TUBEs對多泛素化結構的親和力比單個泛素結合相關結構域（UBA）高出多達1000倍。此外，TUBEs對多泛素化蛋白具有保護作用，使其即使在相對低豐度的情況下也能被檢測到。這些特性有效地“捕獲”了處于多泛素化狀態的蛋白質。UM502M是通過涂覆高容量磁性珠子設計而成的，能夠高效富集多泛素化蛋白，同時最大限度地減少與組織和細胞裂解物中蛋白質的非特異性結合。

艾美捷TUBE 2（高容量磁珠）：

貨號：UM-0502M-1000  

親和標簽：不適用  

純度：（偶聯前）通過SDS-PAGE分析，純度>95%  

分子量：不適用  

數量：1 mL磁性珠子  

物理狀態：液體  

儲存：+4°C。避免在更低溫度下儲存  

應用：  

從細胞系、組織和器官中捕獲多泛素化蛋白  

保護多泛素化蛋白免受去泛素化和蛋白酶體降解  

基于磁珠的ELISA用于研究泛素化蛋白質組  

無標記質譜泛素化蛋白質組分析  

TUBE 2（高容量磁珠）圖片：

圖1. 使用UM502M富集總泛素化蛋白質組。  

將100 uL UM502M磁性珠子加入到300 ug的HeLa細胞裂解物中，這些細胞經以下處理：DMSO和1 uM MG-132處理4小時。數據顯示了使用UM502M在4°C下通過端到端旋轉器對DMSO和MG-132處理的裂解物進行過夜富集的結果。對于蛋白酶體抑制劑（MG-132）處理的樣本，觀察到特征性的增強泛素化條帶，表明對總多泛素化蛋白質組的高效捕獲。富集后的珠子在10% SDS-PAGE和Western blot分析之前，用30 uL 1X Laemmli樣品緩沖液重懸，使用抗泛素抗體（VU101）進行檢測。

文獻參考：

1. Hjerpe, R, Aillet, F, Lopitz-Otsoa, F, Lang, V, England, P, and Rodriguez, MS., Efficient protection and isolation of ubiquitylated proteins using tandem ubiquitin-binding entities. EMBO Rep. 10,1250-1258 (2009).

2. Stormo, Adrienne ED, Farbod Shavarebi, Molly FitzGibbon, Elizabeth M. Earley, Hannah Ahrendt, Lotus S. Lum, Erik Verschueren et al (2022) "The E3 ligase TRIM1 ubiquitinates LRRK2 and controls its localization, degradation, and toxicity." Journal of Cell Biology 221, no. 4.

3. Sarbanes, Stephanie L., Vincent A. Blomen, Eric Lam, S?ren Heissel, Joseph M. Luna, Thijn R. Brummelkamp, Erik Falck-Pedersen, H-Heinrich Hoffmann, and Charles M. Rice. (2021) "E3 ubiquitin ligase Mindbomb 1 facilitates nuclear delivery of adenovirus genomes." Proceedings of the National Academy of Sciences 118, no. 1: e2015794118