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如何正確操作人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒,應該注意哪些細節?

來源:上海娜連生物科技有限公司   2025年05月27日 10:50  

如何正確操作人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒,應該注意哪些細節?


 如何正確操作人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒應該注意哪些細節

人彈力蛋白酶(FE)ELISA試劑盒操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120?mol/L5號標準品150?l的原倍標準品加入150?l標準品稀釋液

60?mol/L4號標準品150?l5號標準品加入150?l標準品稀釋液

30?mol/L3號標準品150?l4號標準品加入150?l標準品稀釋液

15?mol/L2號標準品150?l3號標準品加入150?l標準品稀釋液

7.5?mol/L1號標準品150?l2號標準品加入150?l標準品稀釋液

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50?l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l,然后再加待測樣品10?l(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶標試劑50?l,空白孔除外。

7.溫育:操作同3

8.洗滌:操作同5

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50?l,再加入顯色劑B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.終止:每孔加終止液50?l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

人彈力蛋白酶(FE)ELISA注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD

大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計

算時請*后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。


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