一、硬件校準：確保計數板物理參數達標

1. 腔室厚度檢測

• 工具：使用高精度千分尺（精度≤1μm）測量計數板的腔室高度（標準值通常為 0.1mm）。

• 標準：實測值與標稱值的偏差需≤±2%（即 0.098~0.102mm），否則可能導致細胞分布不均或體積計算誤差。

2. 網格刻度準確性

• 工具：通過顯微鏡配合目鏡測微尺，校準計數板網格的邊長（如標準計數區邊長為 1mm）。

• 標準：刻度誤差需≤±1%，避免因面積計算錯誤導致細胞濃度偏差。

3. 材質與加工工藝

• 檢查計數板表面是否平整、無劃痕或氣泡，邊緣是否光滑（避免液體殘留或飛濺）。

• 一次性塑料計數板需確認無菌包裝完整，避免污染干擾計數結果。

二、操作規范驗證：排除人為誤差

1. 細胞懸液制備

• 均質性檢測：通過渦旋振蕩或吸管吹打使細胞均勻分散，取樣前需充分混勻，避免細胞沉淀導致取樣偏差。

• 適宜濃度范圍：計數時細胞密度建議控制在 1×10?~1×10? cells/mL（濃度過高需稀釋，過低需離心富集），否則可能因細胞重疊或隨機誤差增大影響準確性。

2. 加樣操作標準化

• 使用微量移液器（量程匹配，如 10~100μL）沿計數板邊緣緩慢滴加，確保液體通過毛細作用完覆蓋計數區，無氣泡或液滴溢出。

• 加樣后靜置 1~2 分鐘，待細胞沉降至腔室底部再進行觀察（避免懸浮細胞計數偏差）。

三、結果比對：多方法交叉驗證

1. 與血球計數板 / 自動細胞計數儀對比

• 同一細胞懸液分別用CHT4-SD100-002 計數板和血球計數板（傳統手動方法）或自動細胞計數儀（如 Cellometer、Vi-CELL）進行計數。

• 可接受誤差：兩者結果的相對偏差需≤10%（如手動計數為 5×10? cells/mL，自動計數應為 4.5×10?~5.5×10? cells/mL），否則需排查操作或硬件問題。

2. 臺盼藍染色輔助驗證活細胞計數

• 對于貼壁細胞或需區分死活的樣本，可結合臺盼藍染色（活細胞拒染，死細胞染成藍色），通過計數板同時檢測總細胞數和活細胞數。

• 驗證重點：活細胞比例與預期是否一致（如已知細胞存活率 > 90%，計數結果應吻合）。

四、質量控制：建立長期驗證流程

1. 批次間差異檢測

• 新批次計數板使用前，隨機抽取 3~5 片進行預實驗，對比舊批次結果，確認無顯著差異（如偏差 > 15% 需聯系供應商）。

2. 定期空白對照

• 用無菌 PBS 或培養基代替細胞懸液進行計數，確認計數板無背景雜質或熒光干擾（適用于熒光計數場景）。

3. 人員操作考核

• 對實驗室新手進行計數板操作培訓，通過 “盲樣考核”（已知濃度的標準品）驗證其操作準確性，合格后方可獨立使用。

五、常見誤差來源與解決方案

總結