什么是人肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)elisa試劑盒說明
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)水平。用純化的人肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A),再與HRP標記的肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)濃度。
液體類標本:
標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
血漿:
應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
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