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色譜柱的活化方法

來源:深圳市諾亞迪化學科技有限公司   2025年05月21日 08:21  

?色譜柱活化方法的核心步驟是根據(jù)色譜柱類型選擇合適的沖洗流程,旨在替換保存液、去除雜質并平衡固定相。?不同色譜柱的活化方法差異顯著,需遵循以下分類操作:

一、常見色譜柱活化方法分類說明

  1. ?反相色譜柱(如C18柱)?

    • ?第一步?

      :用純有機溶劑(甲醇或乙腈)沖洗20-30個柱體積?

    • ?第二步?

      :混合過渡流動相(甲醇/乙腈與水比例50:50)沖洗10個柱體積?

    • ?第三步?

      :用實際分析流動相平衡10-30個柱體積直至壓力穩(wěn)定?

    • ?注意事項?

      :活化過程不宜接入檢測器,避免污染?

  2. ?正相色譜柱?

    • ?直接使用流動相平衡20-30個柱體積?

      ,無需過渡沖洗?

    • ?特殊保存狀態(tài)?

      :部分正相柱保存于正己烷或異丙醇,活化時需按出廠說明調整?

  3. ?離子交換色譜柱(如SAX、SCX)?

    • ?第一步?

      :用100%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積?

    • ?第二步?

      :轉換為適合離子強度和pH值的流動相平衡?

  4. ?特殊功能柱(如氨基柱、氰基柱轉為反相使用)?

    • ?預處理?

      :需用異丙醇或乙醇沖洗50-100個柱體積轉換相態(tài)

  5. ?HILIC模式色譜柱?

    • ?活化流程?

      :先用50倍柱體積的50%乙腈/水混合液平衡,再用流動相沖洗20柱體積

二、通用活化原則

  • ?流速控制?

    :初始沖洗采用低流速(如0.5-1mL/min),逐步提升至工作流速?

  • ?溶劑純度?

    :必須使用HPLC級溶劑并提前過濾?

  • ?柱體積計算?

    :標準柱體積約為柱長(cm)× 內徑半徑2(cm2)× π,可根據(jù)具體尺寸換算

三、操作建議

  • ?新柱活化前?

    :建議建立色譜柱性能測試臺賬,追蹤柱壓和峰型變化

  • ?長期保存后?

    :需重新活化,避免使用緩沖鹽保存

  • ?維護擴展?

    :日常使用可搭配預柱保護延長分析柱壽命

?關鍵提示?:活化方法需嚴格參照色譜柱說明書,廠商建議的柱保存液pH適用范圍是操作基準。?


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