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超高效液相色譜儀標準化操作流程與技術要點解析

來源:上海分析儀器銷售中心第一營業部   2025年05月18日 01:50  
  超高效液相色譜儀作為現代實驗室的核心分析設備,其規范操作直接影響檢測數據的可靠性。本文將從儀器準備、參數設置到日常維護全流程解析操作規范,為實驗人員提供標準化操作指南。
  一、開機前準備與系統檢查
  1.環境要求確認:實驗室溫度需穩定在20-25℃,濕度控制在40%-60%,避免陽光直射與震動干擾
  2.氣源壓力檢查:設定流動相脫氣機壓力為0.3-0.4MPa,確認氦氣純度
  3.溶劑系統準備:使用HPLC級溶劑,按照標準比例配置流動相(如A:水含0.1%甲酸,B:乙腈含0.1%甲酸),使用0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15分鐘
  二、系統初始化與平衡
  1.管路沖洗程序:依次用甲醇/水(60:40)沖洗泵、進樣閥、色譜柱60分鐘
  2.壓力測試確認:設置流速0.5 mL/min,觀察基線穩定性,確保壓力波動<±2%(如Waters ACQUITY H-Class)
  3.波長校準:以氘燈/鎢燈為光源,校準檢測器在254nm處的吸收值(誤差<±1nm)
  三、進樣操作規范
  1.樣品預處理:固體樣品需制成0.2-1.0 mg/mL濃度,經過0.22μm濾膜過濾;生物樣品需酶解處理
  2.進樣器維護:每批次分析后用流動相清洗進樣針5次,每周用65%硝酸浸泡30分鐘
  3.進樣量控制:梯度洗脫時進樣體積<10μL(如Agilent 1290 Infinity II),等度洗脫可適當增加至20μL
  四、檢測參數優化
  1.梯度洗脫程序:水相與有機相比例需線性變化,如0-5min(20:80)至20min(80:20),切換時間差<0.1min
  2.流速控制:根據色譜柱規格調整(4.6×250mm柱適用1.0 mL/min,2.1×100mm柱適用0.3 mL/min)
  3.檢測波長選擇:優先采用化合物最大吸收波長,必要時采用多波長檢測(如UV 254nm/280nm雙波長)
  五、數據處理與結果驗證
  1.積分參數設置:峰寬閾值≥5s,斜率靈敏度10-20μV/s,拖尾因子≤1.5
  2.定量方法驗證:R2值>0.999,回收率95-105%,RSD<2%(n=5)
  3.原始數據存儲:按照GLP要求保存原始色譜圖,保留時間差<0.2min(重復性實驗)
  六、系統維護與安全規范
  1.日常維護要點:
  ①每日檢查密封圈狀態,每周更換自動進樣器轉子密封
  ②每月超聲清洗脫氣機管路,每季度校驗流速準確性
  2.關機程序:
  ①用純甲醇-水(50:50)以1mL/min沖洗系統30分鐘
  ②保持柱溫箱溫度在10-15℃待機
  3.安全注意事項:
  ①禁止超壓操作(壓力保護閾值設為30-35MPa)
  ②廢液集中收集處理,避免有機溶劑泄漏
 

 

  結語
  通過嚴格執行上述操作規范,可使超高效液相色譜儀保持最佳運行狀態。規范操作不僅保障數據準確性,更能延長系統使用壽命(正常達10年以上),為精準分析提供可靠技術支撐。

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