生化鑒定條作為成套生化管的升級產品，以其快速、簡單、操作方便的優勢，受到廣大用戶的好評。我公司目前有各種生化鑒定條出售，滿足不同客戶的需求（產品目錄和信息參考：HBI微生物生化鑒定條 ）。但在實際使用過程中，經常會碰到一些疑問或問題，本文將對有關問題進行解釋和討論。

1、做生化鑒定前一定要進行純化嗎？

  對單一菌種進行鑒定，不需要進行純化操作，只需要保證菌體新鮮就行。但對于在選擇性培養基上分離出的菌，最好進行純化后在進行鑒定。原因如下：

  （1）選擇性培養基上初步分離的菌落，不一定是單一菌種形成的，若有其它菌種，會干擾試驗結果，造成誤判；

  （2）選擇性培養基成分復雜，挑菌時若沾取了少量培養基，有可能會對鑒定結果造成干擾；

  （3）選擇性培養基中通常含有一些抑制成分，平板上長出的菌落會受到不同程度的抑制或損傷，活力不好，不利于生化結果的觀察和判定；

  （4）選擇些平板上長出的菌落通常較小，若需要做很多生化試驗，有可能出現菌體不夠用的情況（通常每挑一下接種后，要進行燒環滅菌再進行下一次挑菌，浪費較多）。

  上面兩種情況，無論是為了得到新鮮菌體，還是為了得到較純的菌落，都需要在營養瓊脂平板上進行劃線培養。所以這是菌種生化鑒定前首先要做的準備工作，直接使用初篩菌，試驗結果可能會有一些差異，造成誤判（如圖1）。

圖1 使用純化菌（左）和初篩菌（右）接種鑒定條培養結果的差異

2、接種鑒定條時，一定要用菌懸液來接種嗎？

  鑒定條說明書中要求“取一內盛2mL無菌水或無菌生理鹽水試管，用接種針挑取純化菌落至無菌水中仔細研磨制成0.5麥氏濁度的均一細菌懸液，每孔滴入100mL菌懸液，其中固體和半固體生化管采用穿剌接種（參考：HBI微生物生化鑒定條 ）”。也就是說要用均勻的菌懸液進行接種。這樣要求，是為了盡量使每個孔中接入的菌量相當，使各生化反應趨于同步。如果使用接種針或接種環直接挑菌進行接種，會導致各個孔中接菌量差別很大，從而導致培養結果有所差異（如圖2-a、圖2-b）。

圖2-a  用菌懸液接種的試驗結果（氨基酸對照管變黃，正確）

圖2-b  用接種環挑菌接種的試驗結果（氨基酸對照管紫色，異常）

3、需要每個孔都換槍頭嗎？

  接種過程中，如果能保證每次往培養基孔中滴加菌液時，不會沾染槍頭，則從頭到尾用一個槍頭即可；如果中間出現沾染，則需及時更換槍頭；對于氨基酸和氨基酸對照孔，盡量不用同一個槍頭，以免少量的沾染，影響試驗結果。有的人會執意用接種針挑取菌體進行接種，這時候更要注意，每接種一個孔，都要進行燒環滅菌，主要是為了清除接種針或接種環上沾附的少量培養基，以免對后面孔的試驗結果造成干擾。堅決不能用一個針挑取菌苔后，連續往鑒定條的每個孔中一次性接種完成。這樣很可能造成生化結果的混亂或者試驗失敗。

4、討論：

  對于菌種純化，有些標準中也有描述，可以從選擇性培養基平板上挑菌進行某項生化試驗，如《GB 4789.4  食品安全國家標準  食品微生物學檢驗  沙門氏菌檢驗》中相關內容是這樣描述的：

  但是為了保險，少走彎路，本人還是建議先進行純化后，制成菌懸液再進行接種、培養。這樣也不會因為某一兩個孔的結果不好，而再重新使用一整套生化鑒定條，造成浪費。文中所列的幾種異常情況，不一定每次都能碰到，但是如果不按正常操作進行試驗，試驗過程中出現各種這樣或那樣異常現象的幾率會更大，阻礙試驗進程。

  另外，為了保證結果的一致性和實效性，可以將菌液制備得盡量濃一些，也就是說每個孔中接菌量可適當加大。

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