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色譜法是一種基于物理化學性質差異的高效分離技術，其核心在于通過流動相與固定相的相互作用，實現混合物中各組分的精準分離。以下從分離過程、關鍵影響因素及固定相選擇三方面解析其原理。
一、色譜分離的基本過程
流動相攜帶混合物進入色譜柱：混合物溶解于流動相（液體或氣體），流經固定相（填充于色譜柱中的特定材料）。
兩相間反復分配平衡：各組分與固定相發生吸附、分配等作用，因作用力強弱差異，移動速度不同。
按次序流出：作用力弱的組分先流出，作用力強的被保留更久，最終實現分離。
示例：極性化合物在反相色譜中因疏水作用強，比非極性化合物更晚流出。
二、驅動分離的關鍵因素
1. 組分的化學性質差異
極性基團：羧基（酸性）、磺酸基（酸性）、酰胺基（堿性）、羰基等，決定分子極性。
結構特征：分子大小、手性（立體異構）、電荷分布等。
2. 作用力類型與強度
| 作用力 | 特點 |
| 氫鍵 | 極性基團間質子共享或爭奪（如-OH與-NH2） |
疏水作用 | 非極性分子在極性流動相中聚集（反相色譜核心） |
靜電作用 | 離子交換色譜中電荷吸引（如-SO3?與Na?） |
π-π電荷轉移 | 芳香環間的電子相互作用（苯基固定相） |
尺寸排阻 | 大分子無法進入固定相孔隙（GPC/GFC） |
空間位阻 | 手性固定相手性中心選擇性吸附 |
三、固定相類型與載體選擇
1. 固定相分類
反相色譜（非極性）：C18、C8、苯基（疏水作用主導）。
正相色譜（極性）：硅膠（Si-OH）、NH2、CN（氫鍵與偶極作用）。
離子交換色譜：SAX（強陰離子）、SCX（強陽離子）（靜電作用）。
尺寸排阻色譜：GPC（有機分子）、GFC（生物大分子）（分子篩效應）。
手性色譜：定制手性固定相（如環糊精），分離對映異構體。
2. 固定相載體
硅膠：高比表面積，耐高壓（反相/正相常用）。
雜化顆粒：有機-無機雜化，耐酸堿（寬pH適用）。
聚合物顆粒：耐腐蝕，適合生物大分子（如瓊脂糖凝膠）。
二氧化鋯：高溫穩定性強，用于特殊分離場景。
總結：色譜分離的本質
色譜法的分離效能取決于組分性質-固定相-作用力三者的匹配：
極性分子可通過正相色譜分離；
非極性分子適用反相色譜；
帶電分子依賴離子交換；
大分子基于尺寸排阻效應。
通過精準選擇固定相與流動相，色譜法可實現對復雜樣品的高分辨率、高靈敏度分離，成為分析化學的核心技術之一。
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