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氨基酸(AA)檢測試劑盒(茚三酮比色法)說明書

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2025年04月30日 09:50  

產品簡介:


氨基酸(AA)檢測試劑盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)檢測原理是在弱酸條件下,氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產生藍紫色的二酮茚胺(又稱Ruhemans紫),其吸收峰在波長570nm處,在一定范圍內顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比,該試劑盒主要用于檢測血清、尿液、植物組織、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。該試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料:

1、無氨蒸餾水或去離子水、60%乙醇

2、水浴鍋或恒溫箱、研缽或勻漿器

3、離心機、離心管或試管

4、比色杯、分光光度計

操作步驟(僅供參考):

1、配制 AA Lysis buffer (1×):取 1 份 AA Lysis buffer (5×)加 4 份去離子水混勻即成。

1、準備樣品:

①植物樣品:取新鮮植物組織,清洗干凈,擦干,切碎,迅速稱取 0.4g,按植物組織:AA Lysis buffer(1×)=0.4g:2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨,用無氨蒸餾水稀釋至40ml,混勻,用濾紙過濾,濾液即為氨基酸粗提液,4℃保存備用。

②血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定,-20℃凍存,用于氨基酸的檢測。

③細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織裂解液,如有必要用AA Lysis buffer(1×)進行勻漿,1000g離心5min,留取上清即為氨基酸粗提液,4℃保存,用于氨基酸檢測。

高濃度樣品:如果樣品中含有較高濃度的氨基酸,可以使用AA Lysis buffer(1×)進行恰當的稀釋。

2、配制茚三酮顯色液:取0.3g茚三酮,溶解于50ml茚三酮稀釋液,攪拌至溶解,即為茚三酮顯色液。4℃避光保存,30天有效。注意:茚三酮顯色液30天用不完,應丟棄,重新配制。可稱取一定量的茚三酮再加稀釋液使終濃度為0.6%即可。

3、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer,按茚三酮顯色液:    AA Assay buffer=35:3的比例混合,即為茚三酮工作液,4℃避光密閉保存,2周有效。注意:AAAssay buffer所含物質濃度較高,且有刺激性,如有結晶或沉淀,應于40~70℃密閉溫育,使其溶解后使用。

4、配制維生素C工作液: 取出1支維生素C,準確溶解于30ml無氨蒸餾水,混勻,4℃預冷備用,-20℃保存1周有效。該試劑盒提供的維生素C及其配制的工作液為過量。

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮,如取材后不立即測定,應存于4℃。

2、實驗中用水盡量保證不被氨污染,否則會強烈干擾反應。

3、如果樣品中含有大量蛋白質或多肽也會影響結果的準確性,應先用蛋白沉淀劑去除而后檢測,一般常用乙酸、磺基水楊酸、三等作為沉淀劑。AA Lysis buffer有蛋白沉淀劑的功能。

4、氨基酸與茚三酮顯色反應可用沸水浴15min,但易退色;在80℃水浴中孵育,并適當延長反應時間,可增強顯色效果。產生的藍紫色產物在1h內保持穩定,建議盡快檢測。

5、脯氨酸或羥脯氨酸的檢測,建議使用脯氨酸(PRO)檢測試劑盒(茚三酮比色法)。

6、AA Lysis buffer(5×)和AA Assay buffer有腐蝕性和揮發性,應小心操作,同時應密閉保存,防止揮發。

7、空氣中的氧有可能干擾顯色反應,盡量隔絕空氣。

8、加入維生素C可提高反應的靈敏度,并使顏色穩定,但加入過量,將導致吸光度人為偏大,應嚴格掌握加入的量。

9、如果沒有分光光度計,也可以使用酶標儀測定,但應考慮酶標儀的最大檢測體積。

10、所測樣品的濃度過高時,應用AA Lysis buffer稀釋樣品后重新測定。

 

 

 

有效期:6個月有效。4℃運輸,氨基酸標準收貨后應-20℃保存。 

 


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