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Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定

來源:上海鯤霆生物科技有限公司   2025年04月18日 11:18  

案例說明

適用于黃連配方顆粒中生物堿(表小檗堿、黃連堿、巴馬汀和鹽酸小檗堿)的含量測定。

黃連配方顆粒試樣經甲醇-鹽酸溶液超聲提取后,使用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱,在等度條件下進行分離,鹽酸小檗堿在345nm處有紫外吸收,采用一測多評的方式進行定量。

 

分析條件

色譜柱:Kromasil 100-5-C184.6x250mm (訂貨號:M05CLA25

流動相:A)乙腈        B0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(50:50)(每100mL中加十二烷基硫酸鈉0.4g,再以磷酸調節pH值為4.0

流速:1.0mL/min

進樣10μL

柱溫:30

波長:345nm

 

分析圖譜

3.1

按照上述色譜條件(5.2)進行采集,鹽酸小檗堿對照品溶液(濃度為81.853

μg/mL)的色譜圖如圖1所示,積分結果如表1所示。

Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定

 

 

1鹽酸小檗堿對照品溶液色譜圖積分結果

目標物

保留時間

峰面積

峰高

理論塔板數

分離度

對稱/拖尾因子

小檗堿

18.592

3724.936

155.904

14933

-

1.32

 

由表1中可知,鹽酸小檗堿的理論塔板數為14933,滿足《黃連(黃連)配方顆粒》中鹽酸小檗堿峰的理論塔板數不低于5000的要求。

 

將鹽酸小檗堿對照品溶液連續進樣7針,疊加的色譜圖如圖2所示,結果見表2。


Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定

 

 

2鹽酸小檗堿對照品溶液連續進樣7針重復性數據統計

目標物


1

2

3

4

5

6

7

平均值

RSD%

小檗堿

保留時間

18.592

18.592

18.592

18.592

18.592

18.600

18.592

18.593

0.016


峰面積

3710.612

3716.056

3724.936

3738.334

3743.942

3757.104

3760.972

3735.994

0.524

 

鹽酸小檗堿對照品溶液連續進樣7針重復性測試,保留時間的RSD為0.016%,峰面積的RSD為0.524%

 

3.2 含量測定:

3.2.1 校準曲線

將配制好的鹽酸小檗堿標準工作液(3.9)在HPLC上進行測定,以濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,繪制校準曲線,線性方程及相關系數見圖4,疊加色譜圖見圖5。小檗堿在測定濃度范圍內,曲線的相關系數R2達到0.9995,線性關系良好。

 

Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定


 

 

Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定


3.2.2 含量計算

購買黃連配方顆粒作為樣品,按照5.1的流程對樣品進行處理,并根據樣品的含量,對樣品進行加標回收實驗。按照公式(1)進行計算,樣品的色譜圖及樣品加標的色譜圖如圖6及圖7。

      ----公式(1)

式中:

ω-----為樣品中小檗堿的含量,單位為毫克每克(mg/g);

C----為通過校準曲線計算的樣品中小檗堿濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

V----為樣品的定容體積,單位為毫升(mL);

m----為樣品質量,單位為克(g)。

 

樣品中表小檗堿、黃連堿、巴馬汀的定量采用一測多評的方式,用對照品鹽酸小檗堿的含量進行定量,計算系數為1。表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿的峰位,利用待測成分色譜峰與鹽酸小檗堿色譜峰的相對保留時間進行確定,實測以上四種物質的相對保留時間見表4。

 

4待測成分的相對保留時間

待測成分

保留時間

相對保留時間

標準規定相對保留時間

偏差%

表小檗堿

12.758

0.686

0.710

-3.39

黃連堿

14.183

0.763

0.780

-2.24

巴馬汀

16.658

0.896

0.910

-1.58

小檗堿

18.600

-

-

-

 

由表4可以看出,四種物質的相對保留時間均在標準要求的±5%之內。

Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定

 

 

Kromasil液相色譜柱159|黃連配方顆粒中生物堿的含量測定

 

 

經計算,此黃連配方顆粒樣品中小檗堿的含量為140.8mg/g,加標回收率為102.7%,表小檗堿、黃連堿、巴馬汀的總量為102.2mg/g。

 


ABOUT US 鯤霆生物

上海鯤霆生物科技有限公司深耕生物醫藥行業多年,自創立之初就以為生物醫藥企業提供從研發分析到工業生產的整體化服務為愿景。不斷鉆研色譜分析及制備技術,提升服務品質,致力于成為值得信賴的色譜技術服務提供商。

鯤霆生物現為Nouryon旗下品牌Kromasil液相色譜柱及制備填料中國區總代理。主營業務為代理銷售各類實驗室精密儀器、試劑耗材以及相關領域的技術開發與咨詢服務。

鯤霆生物愿與您攜手同行,共同前進,為更健康,更安全的生物醫藥而不懈努力。

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