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尺寸排阻色譜柱是一種基于分子尺寸差異進(jìn)行分離的高效色譜柱。基于多孔性凝膠作為固定相，利用分子在凝膠孔道中的排阻效應(yīng)進(jìn)行分離。在色譜柱中，大分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻，較早地流出色譜柱；中等體積的分子部分滲透；小分子則能夠完q滲透入凝膠孔道內(nèi)，最后流出色譜柱。因此，樣品分子基本按其分子大小先后流出，從而達(dá)到分離的目的。
尺寸排阻色譜柱的日常維護(hù)：
1、壓力管理
避免過(guò)高壓力沖擊：在使用過(guò)程中，要防止樣品中的顆粒雜質(zhì)或聚集體進(jìn)入色譜柱，造成堵塞，從而導(dǎo)致柱壓突然升高。樣品在進(jìn)樣前必須經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾和離心處理，例如使用0.45μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾，對(duì)于容易產(chǎn)生聚集體的樣品，可以采用高速離心的方法去除大顆粒雜質(zhì)。
壓力監(jiān)測(cè)：定期觀察色譜柱入口處的壓力，最好安裝壓力傳感器進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。如果發(fā)現(xiàn)壓力有逐漸升高的趨勢(shì)，可能是色譜柱部分堵塞或者填料有輕微變化的跡象。此時(shí)應(yīng)盡快采取措施，如用合適的溶劑進(jìn)行沖洗，以恢復(fù)壓力正常。
2、溫度控制
溫度穩(wěn)定性：尺寸排阻色譜柱對(duì)溫度較為敏感，尤其是一些具有溫度敏感性的填料。在使用過(guò)程中，應(yīng)確保色譜柱所處的環(huán)境溫度穩(wěn)定，避免溫度波動(dòng)過(guò)大。例如，將色譜柱安裝在帶有恒溫功能的色譜儀柱溫箱內(nèi)，設(shè)置合適的溫度，并且保證柱溫箱的溫度精度在±0.5℃以內(nèi)。
避免高溫?fù)p傷：在較高溫度下操作時(shí)，要按照色譜柱的使用說(shuō)明書規(guī)定的最高溫度限制進(jìn)行，防止填料的結(jié)構(gòu)因高溫而遭到破壞。同時(shí)，在停止使用后，應(yīng)讓色譜柱逐漸降溫至室溫，避免因快速降溫導(dǎo)致填料收縮不均勻，影響柱效。
3、流動(dòng)相管理
溶劑純度與兼容性：使用的流動(dòng)相溶劑必須是高純度的，并且要與色譜柱填料兼容。低純度的溶劑可能含有雜質(zhì)，這些雜質(zhì)會(huì)在色譜柱內(nèi)積累，影響分離效果。例如，對(duì)于以水為流動(dòng)相的系統(tǒng)，應(yīng)使用超純水，并定期更換新鮮的溶劑。
溶劑過(guò)濾與脫氣：流動(dòng)相溶劑在使用前要經(jīng)過(guò)0.45μm或更小孔徑濾膜的過(guò)濾，以去除其中的顆粒雜質(zhì)。同時(shí)，要對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理，因?yàn)槿軇┲械臍馀輹?huì)引起檢測(cè)器噪聲增加、保留時(shí)間重復(fù)性差等問(wèn)題。常用的脫氣方法有超聲脫氣、氦氣鼓泡脫氣等。
流動(dòng)相組成調(diào)整：避免頻繁地大幅度改變流動(dòng)相的組成，因?yàn)檫@種變化可能會(huì)導(dǎo)致色譜柱填料的溶脹或收縮，影響柱效和分離效果。如果需要改變流動(dòng)相組成，應(yīng)采取漸進(jìn)的方式，例如通過(guò)梯度洗脫程序緩慢地改變流動(dòng)相的比例。
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