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游離脂肪酸測定試劑盒:快速定量分析,適用于組織、細胞及體液樣本

來源:武漢艾美捷科技有限公司   2025年04月09日 16:28  

脂肪酸是末端為羧酸的碳氫鏈。它們作為能量來源、結構組分以及多種生物活性化學物質(統稱為氧化脂質)的前體,在生物體內具有重要作用,這些生物活性物質具有多種生物學功能,包括促炎和抗炎、血管活性、自分泌和旁分泌功能。AkrivisBio的游離脂肪酸檢測試劑盒提供了一種簡單、靈敏的方法,用于測量多種生物樣本中的游離脂肪酸。該檢測基于脂肪酸轉化為輔酶A衍生物,隨后被氧化,同時生成化學計量的過氧化氫,用于氧化ADHP,產生與脂肪酸含量成正比的顏色和熒光。反應中加入增強劑以促進顏色和熒光的發展。

 

艾美捷游離脂肪酸測定試劑盒

貨號:MA-0111

規格:100

樣本類型:組織提取液、細胞裂解液、血清、血漿、尿液、其他生物流體

適用物種:通用(適用于所有物種)

檢測方法:比色法(檢測波長570納米)或熒光法(激發/發射波長=535/587納米)

檢測類型:定量

應用:基于微孔板的比色法/熒光法檢測,用于測量樣本中游離脂肪酸的濃度。

靈敏度:>2微摩爾

儲存條件:-20°C

運輸條件:凝膠冷藏包

 

游離脂肪酸測定試劑盒檢測組分:

-檢測緩沖液:25毫升,貨號WMMA-0111A

-ADHP溶液:200微升,紅色,貨號MA-0111B

-酰基輔酶合成酶:凍干粉,藍色,貨號MA-0111C

-酰基輔酶氧化酶/辣根過氧化物酶:凍干粉,綠色,貨號MA-0111D

-增強劑:200微升,紫色,貨號MA-0111E

-棕櫚酸標準品(1mM):300微升,黃色,貨號MA-0111F

 

游離脂肪酸測定試劑盒檢測原理:

1.脂肪酸轉化為酰基輔酶A

2.酰基輔酶A被氧化,生成過氧化氫。

3.過氧化氫被過氧化物酶利用,將ADHP氧化為熒光素,產生強烈的顏色和熒光。

 

用戶自備材料:

-脂質提取材料(參見AkrivisBioPI-0101脂質提取試劑盒)

-Polytron或勻漿器

-濾器

 

儲存和處理:

將試劑盒儲存于-20°C。使用前將所有組分恢復至室溫。

-ADHP溶液:DMSO在略低于室溫時會凍結。使用前必須恢復至室溫。儲存于-20°C

-酰基輔酶合成酶;酰基輔酶氧化酶/辣根過氧化物酶:用220微升去離子水復溶凍干酶并混合。儲存于-20°C

-棕櫚酸標準品:棕櫚酸標準品冷凍后可能會分成兩相。為了使用,將其置于熱水浴(約80-100°C)中加熱至高于80°C,直至溶液超過其濁點,變得非常渾濁。在加熱時渦旋混合。隨著溶液冷卻,它將再次變得清澈。重復加熱/冷卻循環一次,標準品即可使用。

 

檢測步驟:

1.標準曲線:

-比色法檢測(0-10納摩爾/孔范圍):將0510152025微升的棕櫚酸標準品分別加入96孔板的多個孔中。用檢測緩沖液將所有孔的體積調整至50微升。這樣每孔分別含有0246810納摩爾的標準品。

-熒光法檢測(<1納摩爾/孔):將棕櫚酸標準品稀釋10倍至40微摩爾,方法是將50微升標準品加入450微升檢測緩沖液中,然后將0510152025微升的標準品分別加入96孔板的多個孔中。用檢測緩沖液將所有孔的體積調整至50微升,這樣每孔分別含有02004006008001000皮摩爾的標準品。

2.樣本準備:

-液體樣本可以直接加入96孔板中,并用檢測緩沖液將所有孔的體積調整至50微升。未知樣本的響應必須在所用標準曲線的范圍內。如果未知樣本超出此范圍,則必須稀釋并重新運行。

-細胞(10?)或組織(10毫克)用5%異丙醇/5%Tergitol溶液在小勻漿器中提取,然后過濾以去除不溶物和細胞碎片。樣本已準備好使用。溶液可能呈渾濁狀,但這不影響檢測。每個檢測使用1-20微升樣本。

3.酰基輔酶合成:向所有標準品和樣本孔中加入2微升酰基輔酶合成酶。混合并孵育30分鐘(37°C)。

4.氧化和顯色反應混合液:根據要運行的孔數(樣本和標準品)準備足夠的反應混合液。每個孔準備總共50微升的反應混合液,包含:

-檢測緩沖液:44微升

-酰基輔酶氧化酶/辣根過氧化物酶:2微升

-ADHP溶液:2微升

-增強劑:2微升

-向每個孔中加入50微升反應混合液。在37°C下孵育反應30分鐘,避光。通過在微孔板讀數器中以動力學模式測量反應進程,觀察顏色或熒光的發展是有用的。

5.測量:通過比色法(570納米吸光度)或熒光法(激發/發射波長=535/587納米)監測反應進程。當標準品的信號不再變化時,反應完成。達到終點的時間應少于30分鐘。

6.典型結果:

71.jpg

7.計算:從所有讀數中減去0納摩爾標準品的吸光度。繪制標準曲線。斜率定義了系統的靈敏度(吸光度/納摩爾游離脂肪酸)。將背景校正后的樣本讀數除以斜率,以確定游離脂肪酸的納摩爾含量。將結果轉換回原始樣本中的含量:

-原始游離脂肪酸含量=從標準曲線斜率和未知吸光度確定的納摩爾數,校正稀釋:

-1.確定的納摩爾游離脂肪酸/加入孔中的樣本體積=樣本中的游離脂肪酸納摩爾/微升

-2.樣本中的游離脂肪酸納摩爾/微升×樣本總體積=樣本中的總游離脂肪酸納摩爾

-3.樣本中的總游離脂肪酸納摩爾/細胞數量或組織毫克數=每細胞或每毫克組織的游離脂肪酸納摩爾


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