區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞是在研究細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控機(jī)制以及細(xì)胞死亡機(jī)制和途徑時(shí)常見(jiàn)且非常重要的任務(wù)。  

AkrivisBio的即用型試劑讓這一過(guò)程變得簡(jiǎn)單。我們結(jié)合了一種專有的細(xì)胞可滲透的綠色熒光染料來(lái)染色活細(xì)胞，以及一種紅色非滲透性染料——碘化丙啶（propidium iodide），用于染色所有細(xì)胞。染色后的細(xì)胞可以通過(guò)熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。試劑盒提供了足夠用于4片24孔板的材料。

艾美捷活細(xì)胞與死細(xì)胞區(qū)分染色試劑盒：

貨號(hào)：COS-0103

規(guī)格：包含用于染色4片24孔板的試劑。

樣本類型：貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞

適用物種：所有

檢測(cè)方法：熒光顯微鏡

檢測(cè)類型：定性檢測(cè)

應(yīng)用：用于對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色，以便在熒光顯微鏡下方便地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：-20°C

運(yùn)輸溫度：冰凝膠包運(yùn)輸

保質(zhì)期：自發(fā)貨之日起一年

活細(xì)胞與死細(xì)胞區(qū)分染色試劑盒成分：

-活細(xì)胞染料：50微升，綠色（COS-0103-A）  

-全細(xì)胞染料：50微升，紅色（碘化丙啶，COS-0103-B）  

-染色緩沖液：50毫升（COS-0103-C）  

儲(chǔ)存和穩(wěn)定性：

未開封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于-20°C。染色緩沖液和全細(xì)胞染料（碘化丙啶）開封后可在4°C下儲(chǔ)存。活細(xì)胞染料應(yīng)始終儲(chǔ)存于-20°C。

染色步驟：

1. 根據(jù)要染色的孔數(shù)準(zhǔn)備足夠的染色液。每個(gè)孔需要0.5微升活細(xì)胞染料、0.5微升全細(xì)胞染料和0.5毫升染色緩沖液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)規(guī)模相應(yīng)調(diào)整體積。  

2. 通過(guò)輕柔離心（500×g，5分鐘）收集細(xì)胞（10?個(gè)）。移除并丟棄上清液。  

3. 加入500微升染色液，輕輕重懸細(xì)胞沉淀。  

4. 在37°C下孵育15分鐘。  

5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到載玻片上，并用蓋玻片覆蓋細(xì)胞懸液。放置在顯微鏡載物臺(tái)上進(jìn)行觀察。  

注意：對(duì)于貼壁細(xì)胞，可以直接在蓋玻片上培養(yǎng)。染色時(shí)，傾斜并移除培養(yǎng)基，然后放平，加入0.5毫升染色液并孵育15分鐘。將蓋玻片倒置在載玻片上，放置在顯微鏡載物臺(tái)上。  

6. 使用能夠檢測(cè)熒光素和羅丹明的帶通濾光片（排除較短波長(zhǎng)）的熒光顯微鏡立即觀察細(xì)胞。  

-活細(xì)胞會(huì)被細(xì)胞可滲透的活細(xì)胞染料染成綠色熒光（激發(fā)波長(zhǎng)488納米；發(fā)射波長(zhǎng)518納米）。  

-死細(xì)胞染料會(huì)將活細(xì)胞和死細(xì)胞都染成紅色（激發(fā)波長(zhǎng)488納米；發(fā)射波長(zhǎng)615納米），從而呈現(xiàn)出黃色-紅色的混合外觀。  

注意：不同細(xì)胞類型的染色條件有所不同，因此需要手動(dòng)調(diào)整條件以找到兩種染料的合適濃度。碘化丙啶是一種疑似致癌物，操作時(shí)需格外小心。