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熒光定量PCR儀使用注意事項

來源:上海睿玥實驗器材有限公司   2025年03月25日 16:33  
  熒光定量PCR儀可檢測低至1.5倍的基因表達差異。該系統支持廣泛的基因組學應用,例如分析基因表達、microRNA 和非編碼 RNA、拷貝數變異、藥物代謝酶和蛋白質表達、SNP 基因分型以及突變檢測。

 


 
  在使用熒光定量PCR儀時,需要注意以下幾個方面,以確保實驗結果的準確性和儀器的正常使用:
 
  1. 儀器校準和維護
 
  定期校準:確保儀器在使用前經過定期的校準和驗證,以保證數據的準確性。
 
  維護保養:定期清潔光學系統和樣品倉,保持設備內部清潔,避免污染,影響測量精度。
 
  檢查反應板:確保反應板無損壞,且孔位正確,避免影響反應效率。
 
  2. 試劑準備
 
  避免污染:在操作時要特別注意避免樣本、試劑和儀器的交叉污染。最好在無菌條件下操作,并使用專用的移液器。
 
  試劑的保存和使用:根據試劑的要求保存,避免過期或保存不當導致試劑活性降低,影響PCR效果。
 
  反應體系優化:使用合適的緩沖液、引物、探針等,并根據實驗需要進行優化。
 
  3. 樣品和引物設計
 
  引物設計:確保引物特異性高,避免二聚體或發卡結構的形成,減少非特異性擴增。
 
  樣品濃度:確保模板DNA或RNA的濃度在儀器檢測的最佳范圍內,避免過高或過低濃度影響結果。
 
  4. 反應條件設置
 
  程序設定:根據實驗目標選擇合適的循環程序,優化退火溫度、擴增時間和反應體系,以獲得最佳的擴增效果。
 
  反應體系:確保每個反應管內的成分、體積都準確無誤。最好使用試劑盒推薦的配方。
 
  5. 數據分析
 
  熒光信號監控:實時監控熒光信號的變化,確保在適當的循環次數后開始采集數據,避免過早或過晚的數據采集影響結果。
 
  參考基因選擇:選擇合適的內參基因進行數據歸一化,以消除樣品間的差異。
 
  標準曲線:建立標準曲線時,確保不同濃度的標準品均勻分布,以確保結果的可靠性。
 
  6. 實驗環境
 
  溫度控制:確保實驗環境溫度適宜,避免高溫或低溫影響試劑或樣品的穩定性。
 
  儀器穩定性:操作過程中盡量避免劇烈震動,避免影響PCR儀器的穩定性和準確性。
 
  7. 常見問題排查
 
  無擴增或信號過低:檢查樣品質量、引物設計、反應體系和儀器設置。
 
  非特異性擴增:調整退火溫度,優化引物濃度,檢查樣品的純度。
 
  通過注意以上事項,可以提高熒光定量PCR實驗的成功率和數據的可靠性。

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