細胞凋亡的形態學檢測

1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡

(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體.貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落.

(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態..

磷脂酰絲氨酸外翻分析(Annexin V法)

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細胞膜的內側,但在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中(圖3).Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與PS高親和力特異性結合.將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE)或biotin標記,以標記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生...

線粒體膜勢能的檢測

線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡,而線粒體跨膜電位DYmt的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過 程中最早發生的事件,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細胞凋亡不可逆轉...

DNA片斷化檢測

細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮, 染色質DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段,或180~200bp整數倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜(DNAladder).細胞經處理后...

TUNEL法

細胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和熒光 素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法...

凋亡相關蛋白TFAR19蛋白的表達和細胞定位分析

TFAR19(PDCD5)是由本研究室在國際上首先報導的一個擁有自己知識產權的人類新基因,前期的功能研究表明,它是促進細胞凋亡的增強劑.利用熒光 素(FITC)標記的TFAR19單克隆抗體為探針,對細胞凋亡過程中TFAR19蛋白的表達水平及定位研究發現,凋亡早期TFAR19表達水平增高并出 現快速核轉位現象