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BioAuxilium/THUNDER磷酸AKT pan(T308)TR-FRET細胞信號檢測試劑盒

來源:武漢艾美捷科技有限公司   2025年02月20日 16:51  

用于細胞裂解液中Phospho-AKT 1/2/3T308)的半定量檢測的夾心TR-FRET免疫分析試劑盒。完整的檢測驗證信息可在技術數據表中找到。詳細的檢測協議請參閱通用用戶手冊。

 

艾美捷BioAuxilium-THUNDER磷酸AKT pan(T308)TR-FRET細胞信號檢測試劑盒#KIT-AKTT308P-100組成:

Eu-Phospho-AKT T3085 µL

Acc-Phospho-AKT T30820 µL

AKT對照裂解液(100 µL

5倍裂解緩沖液11 mL

10TR-FRET檢測緩沖液(50 µL

100倍磷酸酶抑制劑混合液(50 µL

 

互補試劑

THUNDER™ AKT泛抗體對照裂解液

THUNDER™裂解緩沖液15倍濃縮)

THUNDER™ TR-FRET檢測緩沖液(10倍濃縮)

 

驗證數據

本試劑盒已通過驗證,可用于使用2-板檢測協議對NIH3T3細胞裂解液中Phospho-AKT泛抗體(T308)的相對定量檢測。

細胞培養:貼壁細胞在96孔細胞培養板中培養48小時(DMEM + 10% CBS)。

細胞處理:細胞處理后,移除培養基,用1X裂解緩沖液150 µL)裂解細胞,裂解緩沖液中補充了磷酸酶抑制劑(1 mM氟化鈉和2 mM焦磷酸鈉)。

孵育與檢測:在室溫下于振蕩器(400 rpm)孵育30分鐘后,將裂解液(15 µL)轉移至384孔檢測板,并加入標記抗體Eu-Ab1FR-Ab25 µL)用于檢測Phospho-AKT泛抗體(T308)。

信號讀?。涸谑覝胤跤?span style="font-family: Calibri;">4小時后,記錄665 nm615 nm處的TR-FRET信號(EnVision®;燈激發)。

 

實驗數據:

51.png


NIH3T3細胞(每孔30,000個細胞,三重復)在室溫下與PDGF-AA的系列稀釋液孵育15分鐘。數據顯示,PDGF-AA處理可刺激NIH3T3細胞中AKTT308位點的磷酸化。

NIH3T3細胞(每孔30,000個細胞,三重復)在室溫下與Wortmannin的系列稀釋液孵育30分鐘,隨后用1 nM PDGF-AA刺激15分鐘。數據顯示,Wortmannin處理可抑制PDGF-AA誘導的NIH3T3細胞中AKTT308位點的磷酸化。

NIH3T3細胞(每孔30,000個細胞)在室溫下分別用不含或含3 nM PDGF-AA的溶液孵育15分鐘。使用每組處理的48個孔來確定Z'因子值。Z'因子值為0.7,表明該檢測方法穩健且適用于高通量篩選(HTS)。

質量控制:Phospho-AKT泛抗體(T308)試劑盒常規測試使用PDGF-AA處理的NIH3T3裂解液。NIH3T3細胞在T175培養瓶中培養至95%匯合,用3 nM PDGF-AA在室溫下刺激15分鐘。細胞裂解后,用1X裂解緩沖液1對裂解液進行系列稀釋,并進行三重復檢測。數據顯示,裂解液稀釋度與TR-FRET比值呈線性關系。

 

艾美捷科技是BioAuxilium的中國區域合作伙伴,為科研工作者提供優質的產品與服務。


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