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小反芻獸疫病毒酶聯抗體檢測試劑盒使用方法及注意事項

來源:賽諾利康生物技術(北京)有限公司   2025年02月20日 10:26  

小反芻獸疫病毒酶聯抗體檢測試劑盒使用方法及注意事項

檢測原理

   本試劑盒由預包被小反芻病毒重組蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,應用酶聯免疫法(ELISA)原理檢測羊血清、血漿樣本中小反芻病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,經溫育后若樣品中含有小反芻病毒抗體,則將與酶標板上抗原結合,經洗滌除去未結合的其他成分后;再加入酶標記物,與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加TMB底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有小反芻病毒抗體。

試劑盒組成

序號

名稱

規格/96T×3

1

酶標記物

12ml×3

2

樣品稀釋液

22ml×3

3

20X濃縮洗滌液

40ml×3

4

底物液A

6ml×3

5

底物液B

6ml×3

6

終止液

12ml×3

7

陽性對照

1.0 ml×3

8

陰性對照

1.0 ml×3

9

酶標板

96T×3

10

封板膜

3







儲存及有效期

28℃保存,有效期12個月。

包被板開封后請于28℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。

適用儀器

450nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。

樣品準備

1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于28℃保存,長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋(如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中,混勻)陰性、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)

小反芻獸疫病毒酶聯抗體檢測試劑盒使用方法及注意事項

檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條,設陰性、陽性對照各1孔,未用的板條盡快密封,28℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl

4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。

6.每孔加酶標記物100μl,置37℃避光反應30分鐘。

7.甩去孔內液體,每孔加250ul工作洗滌液,用震蕩混勻的方式洗滌60秒后棄去,重復洗滌5次,每次洗滌后需拍干液體。

8.根據樣本數量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液,現配現用。每孔加100ul,置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液100μl,混勻,于450nm 測定各孔吸光值(OD值),

參考值

實驗正常的情況下,陽性對照OD-陰性對照OD0.2

檢驗結果的解釋

1. S/P(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)

2. S/P0.4時結果判讀為陽性。

3. 0.2S/P0.4時結果考慮可能存在抗體效價不足或疑似感染。

4. S/P0.2時結果判讀為陰性。

試驗方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測羊血清、血漿中小反芻病毒抗體的粗略評估。

2. 本試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗。

注意事項

1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應保持新鮮。

7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

8.不同批號試劑組分不得混用。



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