“ACCEPTED" 科研人耳中最動(dòng)聽的詞！在科研的征途中，科研想法和得力的研究工具是基石，然而，投稿前后的精心準(zhǔn)備、也會(huì)成為“加速" 文章發(fā)表的金鑰匙！核心期刊的投稿指南和要求隨著期刊雜志對(duì)Western Blot數(shù)據(jù)的要求日益嚴(yán)格，除了常規(guī)的圖片質(zhì)量和分辨率要求，越來(lái)越多的審稿人和編輯要求提供完整的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和整膜數(shù)據(jù)等。在投稿之前，務(wù)必仔細(xì)閱讀期刊的投稿指南和要求，并按要求準(zhǔn)備好圖片和相關(guān)材料，以降低被退回或拒稿的風(fēng)險(xiǎn)。以下是Nature、Cell和JBC這些核心期刊的具體要求，供參考。01 Nature?  強(qiáng)烈反對(duì)在不同凝膠/印跡膜之間進(jìn)行樣品的定量比較；若不可避免，圖例中必須清晰標(biāo)注這些樣品來(lái)源于同一實(shí)驗(yàn)或平行實(shí)驗(yàn)，并且凝膠/印跡膜是平行處理的；?  對(duì)于凝膠中非相鄰泳道的重新排列，必須清晰的標(biāo)記泳道之間的邊界，并在圖例中詳細(xì)說(shuō)明；? 必須確保內(nèi)參對(duì)照(e.g. GAPDH、actin)和目的蛋白在同一張印跡膜上進(jìn)行。若樣品處理對(duì)照在不同的凝膠上電泳，必須在圖例中進(jìn)行標(biāo)注。論文中裁剪的凝膠必須保留所有重要條帶；? 避免使用高對(duì)比度的凝膠/印跡圖，因?yàn)檫^(guò)曝可能會(huì)掩蓋其它條帶；? 作者應(yīng)該仔細(xì)檢查其手稿是否包含以下內(nèi)容：i. 檢查圖表是否有重復(fù)；ii. 檢查凝膠和印跡膜的泳道拼接情況；iii. 明確樣品處理對(duì)照和內(nèi)參對(duì)照；iv. 確保提供的原始掃描圖與圖表對(duì)應(yīng)。02 Cell盡量減少數(shù)據(jù)采集后的處理，如果確實(shí)需要從凝膠/印跡圖中刪除泳道或以任何形式整合數(shù)據(jù)，必須清晰的說(shuō)明這些修改。03 JBCJournal of Biological Chemistry?  JBC要求投稿人在實(shí)驗(yàn)方法部分描述所使用抗體的來(lái)源、種屬信息，包括目錄號(hào)和批次號(hào)。還需要提供數(shù)據(jù)證明所有抗體的特異性。如果使用了新型抗體，作者需要描述抗體的制備過(guò)程，包括抗原/表位的制備和純化，并提供驗(yàn)證抗體特異性的數(shù)據(jù)等；?  不建議對(duì)Western Blot結(jié)果圖進(jìn)行拼接處理，如確實(shí)需要從原始印跡圖中剪切展示，應(yīng)在圖例中清楚的標(biāo)注并解釋。嚴(yán)禁將不同印跡圖的條帶拼接在一起；?  避免對(duì)Western Blot結(jié)果圖過(guò)度裁剪，保留周邊適當(dāng)背景，特別是圖中應(yīng)完整呈現(xiàn)至少一條(理想狀態(tài)下多條)位于目的蛋白條帶上下方的marker；?  JBC強(qiáng)烈建議作者描述其信號(hào)強(qiáng)度定量的方法、如何建立信號(hào)強(qiáng)度與抗原載量之間的線性關(guān)系及如何在各泳道間校正蛋白上樣量。JBC推薦使用考馬斯亮藍(lán)、麗春紅等蛋白染色試劑對(duì)膜進(jìn)行染色，將信號(hào)強(qiáng)度歸一化為總蛋白。同時(shí)JBC鄭重指出，不應(yīng)使用管家基因作為歸一化標(biāo)準(zhǔn)，除非能明確證明實(shí)驗(yàn)處理未對(duì)管家蛋白的表達(dá)產(chǎn)生影響；?  作者應(yīng)準(zhǔn)備好在審稿時(shí)向?qū)徃迦颂峁┰嫉腤estern Blot數(shù)據(jù)、試劑驗(yàn)證和定量分析。JBC也保留對(duì)所有圖像進(jìn)行數(shù)字分析的權(quán)利。解讀投稿圖片的要求越來(lái)越多的機(jī)構(gòu)及期刊注重WB的原始數(shù)據(jù)，比如SCI期刊JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY (J CELL BIOCHEM) 在“作者須知"里提到“從2020年7月后都必須提供WB等的原始gel/blots圖片，且保證重復(fù)率，若發(fā)現(xiàn)有人為修改的地方一律予以拒稿。"接下來(lái)讓我們一起解讀J CELL BIOCHEM對(duì)WB圖片的要求。來(lái)自J CELL BIOCHEM在圖像處理和展示方面重要的原則是最大限度地保持完整的原始免疫印跡。投稿時(shí)應(yīng)向?qū)徃迦撕途庉嬏峁┪醇舨玫挠≯E全掃描圖或照片作為補(bǔ)充文件。如下圖a展示了一個(gè)條帶過(guò)度飽和的例子，這可能掩蓋或至少減弱了樣本間的差異。無(wú)論是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同條帶之間的比較和所加的對(duì)照應(yīng)放在同一張膜上。不同膜的印跡結(jié)果不可以直接合并到一張圖中。如果在一張圖中并排了非相鄰泳道的印跡膜條帶，它們之間應(yīng)有清晰可見的間隔(如下圖b紅色虛線框所示)。（圖片來(lái)源：A brief guide to good practices in pharmacological experiments: Western blotting - PMC (nih.gov)）如有些泳道包含了與研究主題不相關(guān)的數(shù)據(jù)，可從印跡膜中剪去，保留相關(guān)的數(shù)據(jù)(如圖c所示)。但據(jù)期刊要求，仍需向?qū)徃迦嘶蚓庉嬏峁┩暾≯E膜的數(shù)據(jù)(如圖d所示)。在所有的印跡圖像上都應(yīng)顯示或標(biāo)記Marker的分子量位置。如印跡已被水平裁剪，則至少應(yīng)顯示兩個(gè)相鄰的Marker條帶的位置(即，在條帶的上方和下方，如圖c所示)。