慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞全流程詳解

一、細(xì)胞種板

將細(xì)胞種在12孔板中，每孔1.5×10^5個(gè)細(xì)胞。每孔加入1ml wan全培養(yǎng)基。
二、病毒感染

1. 待細(xì)胞生長至30%～50%時(shí)開始轉(zhuǎn)染。
2. 將病毒從冰箱取出，放在冰上融化。
3. 打開生物安全柜，關(guān)閉風(fēng)機(jī)，戴好帽子和口罩。
4. 棄去培養(yǎng)基，用PBS洗三次。
5. 每孔加入500ul wan全培養(yǎng)基。
6. 根據(jù)公式計(jì)算每孔所需病毒量：每孔病毒量（μL）= MOI x 細(xì)胞數(shù) / 病毒滴度（TU/mL）× 1000。

7. 4小時(shí)后，再向孔板中加入500ul wan全培養(yǎng)基，補(bǔ)足1ml。

三、換液

 感染后24小時(shí)，吸去含病毒的培養(yǎng)液，換上新鮮的 wan全培養(yǎng)液，繼續(xù)37℃培養(yǎng)。

四、觀察與篩選

感染后48小時(shí)，通過熒光顯微鏡初步觀察GFP表達(dá)效率。一般感染后72小時(shí)達(dá)到表達(dá)高峰。
對(duì)于攜帶Puromycin抗性基因的病毒，換上含適當(dāng)濃度Puromycin的新鮮 wan全培養(yǎng)液，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞株。

天津益元利康生物科技有限公司：

（一）輻射五大服務(wù)方向：

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理；

2. 國外試劑訂購（直訂，或境外代理）；

3. 基因組測(cè)序（二代，二代+三代）；

4. 基因分型（SNP檢測(cè)）：低/中/中 高通量項(xiàng)目；

5. 生物樣本運(yùn)輸（國內(nèi)、）；

（二）多家代理品牌，涉及30多種較有名品牌，經(jīng)營代理500多個(gè)品牌：

Qiagen、Sigma、R&D、Epigentek、ThermoFisher、DNA Genotek、USA Scientific、

Matreya、Sage Science、List Labs、Macrocyclics、Steraloids、NIBSC、mobio、immunodx、cellsystems、medicago、abcam、CST、Roche、Bethyl、sino Biological、clodrosome、adi BIO-WORLD、TOKU-E、HYPHEN BioMed、moltox、ZeptoMetrix International Humic、biocytex、Toxin Technology、Streck、Elastin、biomax、Orflo Technologies、Accegen、Advbiomart、genlantis、Cygnus Technologies LLC、Enzyme Research、Bio/Data Corporation、Greer Lab 、Solarbio、bangslabs、bioline、musechem、hyphen-biomed、polyplus、moltox 、exiqon、pentapharm、verichemlabs、GenStar、ALZET、lucernatechnologies 、meridian、origene、horizon discovery、Reagents、megazyme、elisasystems………

所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口，特別是冷門品牌，均能給客戶購買到。價(jià)格優(yōu)，貨期短，可加急，快10天到貨；保證服務(wù)質(zhì)量，所有產(chǎn)品均提供售后服務(wù)。大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù)，

公司自成立依靠過硬的服務(wù)和良好的信譽(yù)與各大企事業(yè)單位、科研單位建立長期合作。客戶包括北大，清華，地大，中科院各所，各大藥企等等。

專業(yè)訂購國內(nèi)外試劑耗材，常備現(xiàn)貨，一手貨源，歡迎合作。