測(cè)量KLH（匙孔血藍(lán)蛋白）誘導(dǎo)的抗KLH抗體水平可以定量評(píng)估免疫反應(yīng)（參考文獻(xiàn)1）。本ELISA試劑盒用于快速定量測(cè)量血清或血漿中的小鼠抗KLH IgG水平。另一款配套的ELISA試劑盒，貨號(hào)KA2461，用于測(cè)量小鼠抗KLH IgM水平。

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒用于定量測(cè)量血漿和血清中的KLH IgG。

艾美捷KLH IgG(小鼠)ELISA試劑盒：

貨號(hào)：KA2460

校準(zhǔn)范圍：6.25至100 µg/mL

適用樣本：血漿、血清

樣本體積：100 µL

標(biāo)記：HRP結(jié)合物

檢測(cè)方法：比色法

監(jiān)管狀態(tài)：僅供研究使用（RUO）

測(cè)定類型：定量

反應(yīng)性：小鼠

應(yīng)用：定量

儲(chǔ)存說(shuō)明：將凍干標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存于-20℃。將所有其他組分儲(chǔ)存于4℃。

僅供研究使用（RUO）

測(cè)定原理：

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒基于固相酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）。該測(cè)定使用KLH進(jìn)行固相（微孔板孔）固定，以及辣根過(guò)氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗小鼠IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)。將測(cè)試血清或血漿樣本稀釋后，在微孔板孔中孵育1小時(shí)。隨后洗滌微孔板孔，加入HRP結(jié)合物并孵育45分鐘。抗KLH IgG分子因此被固定化的KLH和檢測(cè)抗體結(jié)合物夾在中間。然后洗滌孔以去除未結(jié)合的HRP標(biāo)記抗體，并加入TMB試劑，在室溫下孵育20分鐘。這將導(dǎo)致藍(lán)色顏色的產(chǎn)生。通過(guò)加入終止液停止顏色發(fā)展，顏色變?yōu)辄S色。在450 nm處用分光光度計(jì)測(cè)量吸光度。抗KLH IgG的濃度與測(cè)試樣本的吸光度成正比。

儲(chǔ)存說(shuō)明：

參考標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)儲(chǔ)存于-20℃以保持最佳穩(wěn)定性。

所有剩余試劑盒組分應(yīng)儲(chǔ)存于4℃。

微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封保存，以盡量減少暴露于潮濕空氣。

如果按照上述說(shuō)明儲(chǔ)存，試劑盒自購(gòu)買之日起六個(gè)月有效。

所需材料但未提供：

精確移液器和槍頭

蒸餾水或去離子水

聚丙烯或玻璃管

渦旋混合器

吸水紙或紙巾

微孔板孵育/振蕩器，混合速度為150 rpm

平板洗滌器

具有0-4吸光度范圍的450 nm平板讀數(shù)器

圖表紙（可選PC繪圖軟件）

使用注意事項(xiàng)：

一般說(shuō)明

僅供研究使用，不用于診斷目的。

在使用試劑盒之前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀并理解說(shuō)明書(shū)。

本試劑盒旨在測(cè)量免疫KLH后14天獲得的小鼠血清或血漿中的抗KLH IgG水平。

所有試劑在使用前應(yīng)放置至室溫（25℃）。

應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳樣本稀釋度。然而，研究表明，對(duì)于大多數(shù)14天后免疫樣本，初始樣本稀釋度為20,000倍效果良好。請(qǐng)勿使用小于25倍的稀釋度。

如果在每個(gè)步驟中，試劑在5分鐘內(nèi)加入微孔板的孔中，則可獲得最佳結(jié)果。

操作限制：

當(dāng)按照詳細(xì)說(shuō)明完整理解并執(zhí)行測(cè)定程序時(shí)，將獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果。

洗滌步驟至關(guān)重要。洗滌不足會(huì)導(dǎo)致精密度差和吸光度讀數(shù)虛高。

試劑準(zhǔn)備：

洗滌液準(zhǔn)備

提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前，將瓶中內(nèi)容物（50 mL）與950 mL蒸餾水或去離子水稀釋。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備

小鼠抗KLH IgG標(biāo)準(zhǔn)品為凍干儲(chǔ)備液。用100 μL蒸餾水或去離子水復(fù)溶（復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品在4℃下穩(wěn)定一周，但如需日后使用，應(yīng)分裝并冷凍于-20℃）。

標(biāo)記5個(gè)聚丙烯或玻璃管，分別為100、50、25、12.5和6.25單位/mL（u/mL）。

在標(biāo)記為100 u/mL的管中，加入抗KLH IgG標(biāo)準(zhǔn)瓶標(biāo)簽上詳細(xì)說(shuō)明的稀釋液體積。然后加入指示體積的抗KLH IgG標(biāo)準(zhǔn)品（顯示在抗KLH IgG標(biāo)準(zhǔn)瓶標(biāo)簽上）并輕輕混合。這提供了100 u/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。

向標(biāo)記為50、25、12.5和6.25 u/mL的管中各加入250 μL稀釋液。

通過(guò)將100 u/mL標(biāo)準(zhǔn)品250 μL與標(biāo)記為50 u/mL的管中的250 μL稀釋液混合稀釋，制備50 u/mL標(biāo)準(zhǔn)品。

同樣通過(guò)連續(xù)稀釋法制備25、12.5和6.25 u/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。

樣本準(zhǔn)備：

一般說(shuō)明：研究表明，KLH免疫小鼠血清中抗KLH IgG的濃度約為750,000 u/mL。為了獲得在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的數(shù)值，我們建議樣本初次稀釋20,000倍，使用以下程序?qū)γ總€(gè)待測(cè)樣本進(jìn)行操作：

分別向不同的管中加入248 μL和318 μL稀釋液。

將2 μL血清樣本加入含有248 μL稀釋液的管中，混勻。這提供了125倍稀釋的樣本。

將2 μL 125倍稀釋的樣本與第二管中的318 μL稀釋液混合。這提供了樣本的20,000倍稀釋。

對(duì)每個(gè)待測(cè)樣本重復(fù)此程序。

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于說(shuō)明，不應(yīng)用于計(jì)算未知量。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí)，應(yīng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

文獻(xiàn)參考：

1. Wada H, Noguchi Y, Marino MW, Dunn AR and Old LJ. T-cell functions in granulocyte/macrophage colony-stimulating factor deficient mice. Proc Natl Acad Sci. 94:12557-61 (1997).