藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇對(duì)藥敏結(jié)果的影響因素
藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇具有一定的原則和要求,不以個(gè)人經(jīng)驗(yàn)或愛(ài)好而更改。為了使臨床試驗(yàn)和醫(yī)療保健服務(wù)水平具備一致的標(biāo)準(zhǔn),許多國(guó)家或機(jī)構(gòu)制定了不同的參照標(biāo)準(zhǔn)。由于參照標(biāo)準(zhǔn)有所差異,故藥敏培養(yǎng)基的要求也有所不同。我國(guó)藥敏試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)CLSI標(biāo)準(zhǔn)文件,則要求除了特殊菌群,K-B法所用的培養(yǎng)基必須是M-H培養(yǎng)基;英國(guó)參照的標(biāo)準(zhǔn)BSAC則要求培養(yǎng)基為ISO培養(yǎng)基,而M-H營(yíng)養(yǎng)瓊脂只適用于葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)。因此在工作中,我們要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膮⒄誄LSI,根據(jù)不同菌群的需求選擇合適、正確的藥敏培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的成分和質(zhì)量是保證藥敏結(jié)果準(zhǔn)確性的先決條件。培養(yǎng)基對(duì)藥敏結(jié)果的影響因素具體如下:
1、pH:pH的變化可導(dǎo)致抑菌圈直徑變大或變小。
2、能拮抗菌藥活性的物質(zhì):如鈣、鎂離子能降低氨基糖苷類藥物的抗菌活性。
3、厚度:標(biāo)準(zhǔn)厚度為4mm,厚度>4mm,抑菌圈則會(huì)變小,<4mm,則會(huì)變小。
4、濕度:使用藥物平皿前一般先在室溫平衡半個(gè)小時(shí),使培養(yǎng)基表面干燥,濕度過(guò)高不利于細(xì)菌的生長(zhǎng)或?qū)咕幤鸬较♂屪饔谩?/span>
5、硬度:硬度過(guò)高不利于抗菌藥在瓊脂中的擴(kuò)散,可導(dǎo)致抑菌圈直徑變小。
6、營(yíng)養(yǎng)條件:營(yíng)養(yǎng)條件太差不利于細(xì)菌的生長(zhǎng),抑菌圈直徑變大;反之,培養(yǎng)及營(yíng)養(yǎng)條件太好會(huì)讓抑菌圈直徑變小。
將這些原理和原則解說(shuō)后,針對(duì)他們對(duì)話中的問(wèn)題,我一一進(jìn)行了剖析:
根據(jù)CLSI,絕大多數(shù)細(xì)菌藥敏試驗(yàn)瓊脂均為標(biāo)準(zhǔn)的M-H瓊脂,M-H瓊脂基本不含有抑制磺胺類藥物和四環(huán)素類藥物抗菌活性的物質(zhì),可滿足大多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)需要,腸球菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高且生長(zhǎng)速度較快,因此可選用M-H瓊脂(MHA),而不是血平皿。對(duì)于大多數(shù)細(xì)菌,MHA是不需要添加羊血,血液或血清中的蛋白會(huì)不同程度結(jié)合抗菌藥分子,影響了抗菌藥物的活性,如羊血中的某些成分可抑制磺胺類藥物和四環(huán)素類藥物抗菌活性,同時(shí)也可影響新生霉素、萘夫西林及頭孢菌對(duì)腸球菌的藥敏結(jié)果。
溶血鏈球菌、肺炎鏈球菌等營(yíng)養(yǎng)要求高的苛養(yǎng)菌則需要使用M-H瓊脂+5%脫纖維羊血培養(yǎng)基,也叫M-H藥敏試驗(yàn)血瓊脂平板(MHBA)。MHBA與普通的分離細(xì)菌的血平板或者哥倫比亞血平板(CNA)雖然長(zhǎng)相相似,但配方及產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(如pH、濕度等)均不一樣,是不能相互代替使用的。為了比較肺炎鏈球菌ATCC49619在MHBA和 CNA培養(yǎng)基上的藥敏結(jié)果,在其他條件均一致的情況下我們分別用MHBA和CNA做了藥敏試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn),CNA的藥敏結(jié)果抑菌圈直徑偏大,細(xì)菌生長(zhǎng)情況較差,從而導(dǎo)致“假敏感"結(jié)果。
因此,作為一名合格的微生物檢驗(yàn)人員,我們應(yīng)該時(shí)刻遵守操作規(guī)程,牢記標(biāo)準(zhǔn)要求,熟讀規(guī)則原理,杜絕含糊不清、似是而非,才能確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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