組織培養中光照也是重要的條件之一，主要表現在光強、光質以及光照時間方面：
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光照強度
光照強度對培養細胞的增殖和器官的分化有重要影響，從目前的研究情況看，光照強度對外植物體、細胞的最初分裂有明顯的影響。一般來說，光照強度較強，幼苗生長的粗壯，而光照強度較弱幼苗容易徒長。在黑暗條件下，植物表現為：莖細、節長、脆弱（機械組織不發達）、葉片小而卷曲、根系發育不良，全株發黃，這種現象稱為黃化現象。
02光質
光質對愈傷組織誘導，培養組織的增殖以及器官的分化都有明顯的影響。如百合珠芽在紅光下培養，8周后，分化出愈傷組織。但在藍光下培養，幾周后才出現愈傷組織。而唐菖蒲子球塊接種15天后，在藍光下培養首先出現芽，形成的幼苗生長旺盛，而白光下幼苗纖細。隨著技術的不斷進步LED作為新型的高效節能光源，光效率高、能耗小、安全、可靠耐用，而且波長正好與植物光合成和光形態形成的光譜范圍相吻合，因此，LED植物生長燈在組織培養中的應用越來越普遍。
光照時間
試管苗培養時要選用一定的光暗周期來進行組織培養，常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。研究表明，對短日照敏感的品種的器官組織，在短日照下易分化，而在長日照下產生愈傷組織，有時需要暗培養，尤其是一些植物的愈傷組織在暗培養下比在光下更好。如紅花的愈傷組織。除某些材料誘導愈傷組織需要黑暗條件外，一般培養都需一定的光照。
光照培養箱是具有光照功能的生物培養設備，主要應用于組織細胞培養、種子發芽、育苗以及微生物培養，選擇遮光罩后，可以與時間功能一起模擬日夜光照。