用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法

來源：上海索寶生物科技有限公司 2012年06月04日 11:54

用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被：用0.05M pH9.5碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含

量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，

4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分

鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，

置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽

性對(duì)照孔）。

3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的

稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液

0.1ml，37℃孵育10～30分鐘。

5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏

色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色

的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)

儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)

零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為

陽性。

相關(guān)產(chǎn)品

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