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AAT Bioquest-Hydroethidine二氫乙錠,活性氧物種的有效探針

來(lái)源:武漢艾美捷科技有限公司   2024年12月06日 16:29  

氫乙啶作為測(cè)量活性氧物種的探針有效地工作。染料自由進(jìn)入細(xì)胞并脫氫為乙錠化合物。該探針已被廣泛用于NK細(xì)胞,并作為鑒定腫瘤中增殖和缺氧細(xì)胞的重要染料。已經(jīng)使用中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞以及HL60細(xì)胞和巨噬細(xì)胞進(jìn)行了研究。這種探針的一個(gè)主要優(yōu)點(diǎn)是它能夠區(qū)分超氧化物和過(guò)氧化氫。熒光發(fā)射發(fā)生在600nm左右。

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氫乙錠[二氫乙錠]的化學(xué)結(jié)構(gòu)

 

艾美捷AAT Bioquest-Hydroethidine二氫乙錠

貨號(hào) 15200

單位尺寸 25 毫克

分子量 315.41

溶劑 DMSO

激發(fā)(納米) 500

發(fā)射(納米) 582

預(yù)期用途 僅用于研究(RUO

風(fēng)險(xiǎn)短語(yǔ) R20, R21, R22

儲(chǔ)存 冷凍(< -15°C);盡量減少光照暴露

熒光微孔板讀取器

激發(fā) 520 納米

發(fā)射 600 納米

截止 550 納米

推薦板 實(shí)心黑色

 

庫(kù)存溶液的準(zhǔn)備:

除非另有說(shuō)明,所有未使用的庫(kù)存溶液應(yīng)在制備后分成單次使用的小份,并儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融。


配制5-10 mMDMSO庫(kù)存溶液。注意:未使用的DMSO庫(kù)存溶液應(yīng)分裝到單次使用的小瓶中,并儲(chǔ)存在-20°C。避光保存。

 

工作溶液的準(zhǔn)備:


在生理緩沖液(如PBS、HBSSHEPES)中配制5-20 µM的染料工作濃度。注意:您的應(yīng)用的最佳工作濃度必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。

 

樣品實(shí)驗(yàn)方案:

將等體積(例如100 µL的細(xì)胞在生長(zhǎng)介質(zhì)中)的染料工作溶液加入到細(xì)胞中,然后在室溫或37°C下孵化細(xì)胞560分鐘。

在將細(xì)胞暴露于實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)因素之前,確定加載細(xì)胞的樣本的基線熒光強(qiáng)度。

 

陰性對(duì)照應(yīng)按以下方式評(píng)估:

檢查染料和緩沖液/介質(zhì)的無(wú)細(xì)胞混合物的熒光,無(wú)論是否含有誘導(dǎo)劑。在沒(méi)有細(xì)胞外酯酶和其他氧化酶的情況下,隨時(shí)間熒光的逐漸增加可能與自發(fā)水解、大氣氧化和/或光誘導(dǎo)氧化有關(guān)。

 

檢查未經(jīng)處理(對(duì)照)的加載細(xì)胞的熒光,這些細(xì)胞一直在生長(zhǎng)介質(zhì)或緩沖液中維持。在健康細(xì)胞中,氧自由基被細(xì)胞酶和/或天然抗氧化劑清除。在染料加載恢復(fù)期之后,健康細(xì)胞應(yīng)表現(xiàn)出在實(shí)驗(yàn)期間相對(duì)穩(wěn)定的低水平熒光;然而,可能觀察到熒光的逐漸增加(由于自氧化)或減少(由于細(xì)胞中染料的丟失或光漂白)。在沒(méi)有任何刺激或誘導(dǎo)的情況下,健康、未經(jīng)處理的細(xì)胞中熒光的突發(fā)可能表明細(xì)胞死亡的進(jìn)展或其他氧化事件。

 

陽(yáng)性對(duì)照可以用叔丁基過(guò)氧化氫(TBHP)刺激至約100 µM的最終濃度(根據(jù)細(xì)胞的敏感性和反應(yīng)增減劑量)。

 

文獻(xiàn)參考:

View all 24 references: Citation Explorer

The confounding effects of light, sonication, and Mn(III)TBAP on quantitation of superoxide using hydroethidine

Authors: Zielonka J, Vasquez-Vivar J, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2006): 1050

Pulse radiolysis and steady-state analyses of the reaction between hydroethidine and superoxide and other oxidants

Authors: Zielonka J, Sarna T, Roberts JE, Wishart JF, Kalyanaraman B.

Journal: Arch Biochem Biophys. (2006)

Generation of superoxide anion by equine spermatozoa as detected by dihydroethidium

Authors: Burnaugh L, Sabeur K, Ball BA.

Journal: Theriogenology. (2006)

Analysis of dihydroethidium-derived oxidation products by HPLC in the assessment of superoxide production and NADPH oxidase activity in vascular systems

Authors: Fern, undefined and es DC, Wosniak J, Pescatore LA, Bertoline MA, Liberman M, Laurindo F, Santos CX.

Journal: Am J Physiol Cell Physiol. (2006)

Mechanistic similarities between oxidation of hydroethidine by Fremy's salt and superoxide: stopped-flow optical and EPR studies

Authors: Zielonka J, Zhao H, Xu Y, Kalyanaraman B.

Journal: Free Radic Biol Med (2005): 853

 

AAT Bioquest 致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域,包括吸收(顏色),熒光和發(fā)光技術(shù)。幫助科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué),免疫學(xué),細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。艾美捷科技是AAT Bioquest 的中國(guó)代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。


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