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中國藥典新增9120指導原則,多肽藥物氨基酸組成分析有法可依

來源:島津企業管理(中國)有限公司   2024年12月03日 09:26  

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導讀

多肽藥物的氨基酸種類和序列決定了其生物活性和功能,故準確地測定其氨基酸組成對藥物質量的控制非常重要。

2024年3月12日正式實施的《中華人民共和國藥典》(2020年版)第一增補本(四部)中新增“9120氨基酸分析指導原則”(以下簡稱“指導原則”),指出蛋白質或多肽中的氨基酸以結合形式存在,必須經過水解處理,形成游離氨基酸后再進行氨基酸測定。又由于氨基酸通常紫外吸收較弱,需要衍生后進行測定。氨基酸分析方法繁多,指導原則指出藥品中氨基酸分析通常采用柱前衍生反相色譜法和柱后衍生離子交換色譜法,柱前衍生的氨基酸通常采用高效液相色譜儀,柱后衍生的氨基酸一般使用商品化的氨基酸分析儀進行分離檢測。

 

 

指導原則中收錄了4種柱前衍生方法和2種柱后衍生方法,其中方法三——柱前OPA-FMOC衍生氨基酸測定法明確提到自動柱前衍生法,指出衍生化操作可由具有自動衍生功能的進樣器完成。

 

表1. 指導原則中收錄的氨基酸測定法

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津解決方案

島津可提供指導原則中規定的兩種自動衍生氨基酸測定法,分別是使用高效液相色譜儀進行的自動柱前OPA-FMOC衍生氨基酸測定法和使用氨基酸分析儀進行的自動柱后三酮衍生氨基酸測定法,相比手動衍生,自動衍生重復性更好,更省時省力。

 

1自動柱前OPA-FMOC衍生法測定司美格魯氨基酸組成和氨基酸比值

√ 方案特色:參考藥典指導原則,使用島津氨基酸全自動柱前衍生方法包(AJS-01),適配多型號島津液相,自動進樣器自動衍生,重復性好,結果準確。

 

儀器配置和標準品色譜圖

島津氨基酸全自動柱前衍生方法包(AJS-01)含氨基酸專用分析柱、氨基酸混合標準溶液、衍生試劑、緩沖液和內標溶液,支持島津全系列液相色譜儀,即裝即用,利用自動進樣器自動衍生,高效便捷。

 

圖片圖片 

圖1. 22種氨基酸混標色譜圖

(含兩種內標,上:338 nm,下:262 nm)

 

司美格魯氨基酸組成和氨基酸比值分析結果

司美格魯肽是一款用于糖尿病治療和體重管理等病癥的明星多肽藥物,主鏈由17種31個氨基酸組成。參考指導原則對司美格魯樣品分別進行鹽酸水解和氫氧化鈉水解處理,由于鹽酸水解多肽會破壞色氨酸結構,所以利用氫氧化鈉水解法分析司美格魯肽中的色氨酸。

司美格魯樣品中檢出17種氨基酸,與理論氨基酸組成一致。氨基酸比值與理論值的相對誤差在0.10~8.86%之間,結果準確。17種氨基酸的回收率在93.8~110.8%之間,方法可靠。

 

圖片 

圖2. 司美格魯化合物信息

 

圖片 

圖3. 司美格魯樣品色譜圖

2自動柱后三酮衍生法測定多肽樣品氨基酸比值

√ 方案特色參考藥典指導原則,使用島津氨基酸分析儀 LC-16AAA,試劑、耗材、專用軟件配套齊全,可全自動、高效、準確地測定樣品。

 

儀器配置和標準品色譜圖

島津氨基酸分析儀 LC-16AAA,結合配套流動相、標準品和衍生試劑,以及簡單易操作的專用軟件,軟件內置實驗方法,可全自動進行樣品測試。

 

圖片圖片 

圖4. 19種氨基酸混標色譜圖

(上:570 nm,下:440 nm)

 

某多肽樣品分析結果

使用島津氨基酸分析儀LC-16AAA,采用柱后三酮衍生氨基酸鈉離子交換系統測定法,測定了某多肽樣品鹽酸水解和氫氧化鈉水解樣品,共檢出12種氨基酸,氨基酸組成和氨基酸比值與預期一致。

圖片 

圖5. 某多肽樣品色譜圖

 

結語

中國藥典增補版新增的氨基酸分析指導原則,首次明確了氨基酸測定方法,多肽類藥物氨基酸組成和氨基酸比值分析可據此選擇適宜的分析方法。自動衍生相比手動衍生,重復性更好,省時省力。島津自動柱前OPA-FMOC衍生和自動柱后三酮衍生氨基酸測定平臺,操作便捷、結果可靠,均可滿足指導原則的要求,也為多肽藥物氨基酸組成和氨基酸比值分析提供了更豐富的選擇。

 

撰稿人:唐雪

 

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