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雞酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒樣本處理要求

來源:上海撫生實業有限公司   2024年11月25日 13:28  

雞酸性磷酸酶(ACP)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中酸性磷酸酶(ACP)含量。

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞酸性磷酸酶(ACP)水平。用純化的雞酸性磷酸酶(ACP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶(ACP),再與HRP標記的酸性磷酸酶(ACP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性磷酸酶(ACP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中雞酸性磷酸酶(ACP)濃度。

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

※注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的最高值,請將樣品做適當倍數稀釋后檢測,建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數。



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