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胰蛋白酶解離法檢測HBsAg-CIC

來源:上海源葉生物科技有限公司   2012年05月12日 10:32  

用3.5%PEG選擇性地沉淀血清中CIC,繼之用胰蛋白酶消化沉淀物中的抗體蛋白,分離出抗原部分,用反向間接血凝法測定HBsAg滴度。與不加胰蛋白酶的對照管比較,如HBsAg滴度升高,則說明有HBsAg-CIC的存在。

1.試劑
①pH8.4硼酸鹽緩沖液(BBS):配制法同*節中PEG沉淀試驗;
②7%PEG及3.5%PEG溶液:用BBS配制;
③10mg/mL胰蛋白酶溶液:用pH8.2巴比妥緩沖液配制。

2.操作步驟
(1)在測定管與對照管內務加待測血清0.2mL。
(2)兩管各加pH8.4BBSl.8mL,將血清作1:10稀釋。
(3)各加7%PEG 2mL,充分混勻后,4~C冰箱放置18h。
(4)在10%左右條件下2 500r/min離心20min,棄上清
(5)將沉淀物懸浮于4mL 3.5%PEG溶液中,2 500r/rain離心20min,棄上清。
(6)于測定管中加入0.2mL胰蛋白酶溶液,對照管加0.2mLBBS,混勻后置37%水浴30rain,其間振蕩3—4次。取出后,立即置56%水浴5min。
(7)將測定管、對照管及未經處理的血清分別作系列倍比稀釋,用反向間接血凝試驗檢測HBsAg滴度。

3.結果判斷
①測定管HBsAg滴度在1/16以上,且滴度高于對照管1個稀釋度以上者為HBsAg-CIC陽性;
②測定管與對照管HBsAg滴度相同,但其滴度高于血清游離HBsAg1個稀釋度以上者也為HBsAg-CIC陽性。

4.臨床意義 胰蛋白酶解離法檢測HBs-Ag-CIC簡便而敏感,有助于確定乙肝病程中有無抗原特異性復合物形成,估計是否有可能形成肝外系統病變。

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