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精液質(zhì)量分析方案

來源:自然基因科技有限公司   2024年10月25日 16:24  


精液檢查包括精子的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)型和功能檢查。

 

精液檢查的主要的目的有:

評(píng)價(jià)男性生育功能,為不育癥的診斷和療效觀察提供依據(jù);

輔助男性生殖系統(tǒng)的診斷;

輸精管結(jié)扎術(shù)后的療效觀察;

計(jì)劃生育和科研;

為人工授精和精子庫篩選上等精子;

法醫(yī)學(xué)鑒定。


一、標(biāo)本采集

1.準(zhǔn)備工作:向受檢者解精液檢查的意義,標(biāo)本采集方法和注意事項(xiàng)。標(biāo)本采集室在實(shí)驗(yàn)室附近,室溫應(yīng)控制在20-35攝氏度。室內(nèi)必須清潔、肅靜、無人為干擾;③采集標(biāo)本前禁欲3-7天。采集精液前排凈尿液。

2.采集方法:將一次射出和全部精液直接排入潔凈、干燥的容器內(nèi)。開始射出的精液精子濃度高。終末部分精子濃度低。采集微生物培養(yǎng)標(biāo)本須無菌操作。

3.標(biāo)本運(yùn)送:精液采集后應(yīng)立即送檢。溫度低于20攝氏度或高于40攝氏度將影響精子活動(dòng)故冬季應(yīng)注意保溫,可將標(biāo)本瓶裝入內(nèi)衣袋貼身運(yùn)送。

4.標(biāo)本采集次數(shù):因精子生成日間變動(dòng)較大,不能僅憑一次檢查結(jié)果做診斷。一般應(yīng)間隔1-2周檢查一次。連續(xù)檢查2-3次。


二、一般性狀檢查

(一)量

精液液化后測(cè)定其排出量。有生育力的正常男性一次射精體積為2-6毫升,平均3.5ml。一次射精量與射精頻度呈負(fù)相關(guān)。若禁欲5-7天射精量仍少于2毫升,視為精液減少;若不射精,稱為無精液癥(aspermia)。精漿是精子活動(dòng)的介質(zhì),并可中和生殖道的酸性分泌物,以免影響精子活力。精液量減少(精漿不足)不利于精子通過生殖道進(jìn)入輸狼管,影響受精。若一次射精量超過8毫升,精子被稀釋,也不利于生育。此可因垂體前葉促性腺素的分泌功能亢進(jìn),使雄**的水平升高所致亦可見于禁欲時(shí)間過長(zhǎng)者。


(二)外觀

1.顏色和透明度:正常精液呈灰白色,自行液化后為半透明的乳白色,久未射精者可略顯淺黃色。凡精液呈鮮紅、淡紅、暗紅或醬油色并含有大量紅細(xì)胞者稱為血精,可能由于前列腺和精非特異性炎癥、生殖系結(jié)核、腫瘤或結(jié)石所致黃色或棕色膿性精液見于前列腺炎和精囊炎。

2.粘稠度:正常情況下新排出的精液迅速凝成膠胨狀,然后逐漸變化。若新排出的精液呈米湯樣,可能為先天性精囊或精囊液流出管道阻塞所致精液稀薄,粘稠度下降,也要見于精子濃度太低或無精子癥時(shí)。


(三)氣味

正常精液具有栗花和石楠花的特殊氣味,由于前列腺液產(chǎn)生。


(四)液化時(shí)間

精液液化時(shí)間是指新排出的精液人膠胨轉(zhuǎn)變?yōu)樽杂闪鲃?dòng)狀態(tài)所需的時(shí)間。有關(guān)精液凝固與液化的過程極其復(fù)雜,有相當(dāng)多的物質(zhì)參與,例如前列腺與精囊分泌物等都可能影響其時(shí)間長(zhǎng)短,此外也受溫度影響。在室溫下,正常精液排出后60分鐘內(nèi)液化。前裂腺炎時(shí),由于其功能影響,導(dǎo)致液化時(shí)間延長(zhǎng),甚至不液化,不液化可抑制精子活動(dòng)力,而影響生育能力。


三、化學(xué)檢查

精漿中的一些生化標(biāo)志物可反映副性腺性功能。例如檸檬酸、鋅、谷氨酰胺轉(zhuǎn)酞酶和酸性磷酸酶反映前列腺功能;果糖和前列腺素反映精囊功能;甘油磷酸膽堿和α葡萄苷酶反映附睪功能。這些特異性標(biāo)志物總排出量降低反映分泌功能低下,可用以評(píng)價(jià)男性副性腺的分泌功能。


(一)PH

精液PH測(cè)定應(yīng)在射精后1小時(shí)內(nèi)完成,放置時(shí)間延長(zhǎng),PH下降。正常精液PH7.2-8.0。如PH<7并伴少精癥,可能是由于輸精管、精囊或附睪發(fā)育不全。

弱堿性的精液射入生殖道后可中和生殖道分泌物中的有機(jī)酸,利于精子游動(dòng)。當(dāng)PH<7>8時(shí)均影響精子活動(dòng)。


(二)果糖

精漿中的果糖來自精囊液,由精囊所分泌。它是精子活動(dòng)的能源。精子軸絲收縮依賴STP供給能量,而ATP可由果糖分解產(chǎn)代謝產(chǎn)生,故精漿果糖濃度減低將使精子活動(dòng)力減弱,影響受精率。


(三)酶類

1.酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)精漿中的酸性磷酸酶幾乎全部來自前列腺,屬前列腺酸性磷酸酶。因此測(cè)定精漿中ACP有助于了解前裂腺功能和診斷。前列腺炎時(shí)PAP活性減低;前列腺癌和前列腺肥大時(shí),PAP活性可增高。PAP有促進(jìn)精子活動(dòng)的作用。精漿中PAP減低,精子活動(dòng)減弱,可使受精率下降。

[參考值] >200U/一次射精(β-硝基酚法)


2.乳酸脫氫酶-XLD-X

精液中有6種乳酸脫氫酶同工酶,其中LD-X活性*強(qiáng),約相當(dāng)于LD總活性的1/3LD-X在是存在于精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和精子線粒體中特異酶,具有組織特異性,對(duì)精子生成、代謝、獲能、活動(dòng)能力和受精過程均有重要作用。

LD-X測(cè)定常用電泳法,但較繁瑣。1988年國(guó)內(nèi)建立了直接比色法,方法方便,易于普及。

 [參考值] LD-X/LD>40%


3.精子頂體酶

存在于精子項(xiàng)體內(nèi),是一種蛋白水解酶,在受精過程中起重要作用,可用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯-醇脫氫酶(N-benzoy –L-arginine sthyl esteralcohol dehydrogenaseBAEE-ADH)法測(cè)定。 

[參考值 ] BAWW-ADH法(X±s36.72±21.43U/L


(四)精漿鋅

精漿鋅測(cè)定可作為評(píng)價(jià)男性生育功能和診治不育癥的參考指標(biāo)之一。

[參考值] Zn(X±s)2.4μmol/一次射精


四、顯微鏡檢查

(一)涂片檢查

涂片檢查也是檢查輸精管結(jié)扎效果的常規(guī)方法。一般于術(shù)后經(jīng)5-6次射精,原貯于附睪和精囊內(nèi)的精子已排凈。通常于術(shù)后第六周開始檢查。每周1-2次。若連續(xù)三次查不到精子則可認(rèn)為手術(shù)成功。否則說明手術(shù)失敗。

 

(二)精子活動(dòng)力和存活率

1.活動(dòng)力:精子活動(dòng)力(sperm motility)是指精子向前運(yùn)動(dòng)的能力。WHO將其分為四級(jí):A:精呈前向運(yùn)動(dòng);B:慢或呆滯的前向運(yùn)動(dòng);C:非向前運(yùn)動(dòng);D:不動(dòng)。

活動(dòng)力正常值:射精后60分鐘內(nèi),精子50%或更多具有前向運(yùn)動(dòng),25%或更多具有快速前向運(yùn)動(dòng)。精子活動(dòng)力減弱或死精子過多是導(dǎo)致不育的主要原因。

2.精子存活率以粗子比率表示,若不活動(dòng)的精子較多,應(yīng)時(shí)持體外活體染色檢查,以鑒別其死活。活精子的細(xì)胞膜能阻止伊紅Y、臺(tái)盼藍(lán)等染色劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),故不被染色;死精子細(xì)胞膜完整性受損。失去屏障功能,可被染色成橘紅或藍(lán)色。有生育力男性伊紅染色法的活精子率≥75%


(三)精子數(shù)量

通過精子計(jì)數(shù)可求得精子濃度,乘以精液量還可求得一次射精排出的精子總數(shù)。正常成年男性,精子數(shù)量個(gè)體間的差異較大,精子濃度為(50-100×109/L。<20×109/L為少精子癥;正常人一次射精排精子總數(shù)為≥40×106。精子數(shù)量減低可見于:精索靜脈曲張;有害金屬和放射性損害;先天性和后天性,如睪丸畸形、結(jié)核、淋病、炎癥等);輸精管、精囊缺陷;老年人在50歲以上者精子生成減少。


(四)精子形態(tài)

通常用于精子形態(tài)學(xué)檢查的方法的有兩種,一種是制成新鮮濕處副縣長(zhǎng)相差顯微鏡觀察;加一種是將精子固定、染色后用亮視野光學(xué)顯微鏡觀察。兩**法檢查的精子形態(tài)無明顯差別,染色后精子頭可能稍有縮小。

1.正常精子形態(tài)檢測(cè)政黨精子形態(tài)的應(yīng)遵循嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn):正常精子頭部呈橢圓形,其正常標(biāo)準(zhǔn)為頭部長(zhǎng)度為4.0-5.5μm,寬為2.5-3.0μm,長(zhǎng)與寬的比值為1.5-1.75項(xiàng)體區(qū)占頭部的40-70%必須不存在頸、中段或尾部的缺陷;細(xì)胞質(zhì)微粒不大于正常頭部的1/3將所的處于邊沿異常狀態(tài)的清子均列為不正常。

2.有缺陷精子:用這種形態(tài)學(xué)分析方法考慮的精子細(xì)胞功能部位,因此認(rèn)為沒有必要常規(guī)的去區(qū)分所有頭部大小和形態(tài)之間可劃或尾部缺陷之間的變異如果大多數(shù)精子細(xì)胞中出現(xiàn)某一種部位的異常,則應(yīng)對(duì)這一普通的缺陷給予注釋。需記錄的缺陷有:

1)頭部形狀、大小缺陷:包括大頭、小頭、錐形頭、梨頭、無定形頭、空泡樣頭(頭部大于20%區(qū)域出現(xiàn)不著色的空泡區(qū)、)雙頭或以上缺陷的聯(lián)合體。

2)頸、中段缺陷:包括缺尾可見到游離或脫落的頭部,未附著或彎曲尾尾與頭部長(zhǎng)軸結(jié)呈90度角,腫脹、不規(guī)則、彎曲的中段,異常薄的中段無線粒體鞘或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。

3)尾部異常:包括短尾、多尾、發(fā)夾狀尾、斷尾、寬度不規(guī)則或卷尾、或尾部伴有末端微滴,或以上任何類型缺陷的聯(lián)合體。

4)細(xì)胞質(zhì)微粒:大于正常頭部的面積的1/3。細(xì)胞質(zhì)微粒一般位于頸可中段部分,也有未成熟精子微粒沿尾部分而布在不同部位。

精子形態(tài)

 


(五)未成熟的生殖細(xì)胞

未成熟的男性生殖細(xì)胞即生精細(xì)胞,包括精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母的細(xì)胞。這神經(jīng)過敏細(xì)胞胞體較大,常有1-2個(gè)核,有時(shí)易與中性粒細(xì)胞相混淆,尤其是用未染色精液鏡檢時(shí)不易識(shí)別,需在時(shí)可用過氧化物酶染色鑒別,前者為陰性,后者為陽性,正常人未成熟精細(xì)胞<1%。當(dāng)曲細(xì)精管受到**或其它因素的影響或損害時(shí),精液壓中可見較多的病理型生精細(xì)胞。


 

五、微生物學(xué)檢查

檢查應(yīng)在常規(guī)的條件下,采集精液于無菌容器內(nèi),常規(guī)涂片進(jìn)行革蘭氏染色或抗酸染色檢查等,亦可于37攝氏度液化30分鐘后作**培養(yǎng);需氧培養(yǎng)結(jié)果>1000CFU/ml方有臨床意義。

 

近年來淋病奈瑟菌引起的生殖道感染有所增加,許多實(shí)驗(yàn)室開展了淋球菌快速檢查項(xiàng)目,如直接熒光抗體染色等,亦有應(yīng)用PCR技術(shù)檢查者。直接熒光抗體染色靈敏度高,但特異性差,PCR技術(shù)需嚴(yán)防污染。


六、精子功能檢查

常用的試驗(yàn)有:體內(nèi)穿透試驗(yàn)、體外穿透試驗(yàn)(in vitro,penetration test)。

 

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