Hypoxyprobe™-F6試劑盒組件的詳細(xì)描述：

Hypoxyprobe™-F6 (CCI-103F)是一種六氟取代的2-硝基咪唑，具有六個(gè)磁等價(jià)的氟原子；分子量為337.2；水溶性為5.3毫摩爾，相當(dāng)于1.8毫克/毫升。CCI-103F通常以10%二甲基亞砜/花生油混合物腹腔給藥（Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。在避光條件下儲(chǔ)存時(shí)，CCI-103F非常穩(wěn)定。

CCI-103F在缺氧細(xì)胞中被還原激活。激活的中間體與蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中的巰基（硫醇）基團(tuán)形成穩(wěn)定的共價(jià)加合物。初級(jí)抗CCI-103F抗血清與這些加合物結(jié)合，允許通過免疫化學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。

抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6）與還原激活的CCI-103F的蛋白質(zhì)加合物結(jié)合，并作為稀釋的兔抗血清供應(yīng)，含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑。感興趣的組織可以通過對(duì)福爾馬林固定的石蠟包埋切片或冷凍固定切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究，通過組織解離后的流式細(xì)胞術(shù)，或通過Western blotting進(jìn)行研究。抗CCI-103F抗血清與CCI103F的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但組織處理在準(zhǔn)備免疫組織化學(xué)測(cè)定時(shí)會(huì)沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組織化學(xué)檢測(cè)僅依賴于缺氧組織中CCI103F的蛋白質(zhì)加合物。

在福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片上進(jìn)行免疫過氧化物酶分析，涉及將組織切片與大約1:500稀釋的抗CCI-103F抗血清100微升孵育。然后應(yīng)用色原性山羊抗兔二抗以顯示缺氧標(biāo)記物加合物的分布。下面提供了一個(gè)詳細(xì)的免疫過氧化物酶協(xié)議作為一般指南，但強(qiáng)調(diào)Hypoxyprobe™技術(shù)是穩(wěn)健的，鼓勵(lì)研究者自行修改。請(qǐng)參閱Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005及其中引用的關(guān)于冷凍切片的研究。

艾美捷Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)：

貨號(hào)：HPB-CCI-103F-250mg

應(yīng)用：使用Hypoxyprobe™-F6試劑盒通過免疫化學(xué)檢測(cè)手段，包括免疫過氧化物酶、免疫熒光或流式細(xì)胞術(shù)，來測(cè)量組織和細(xì)胞中的缺氧。（參見Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006；Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005）。

數(shù)量：a. Hypoxyprobe™-F6試劑盒分別包含100、200或1000毫克的CCI-103F（Hypoxyprobe™-F6）。在小動(dòng)物研究中通常使用的劑量是每公斤體重60毫克。

b. 每個(gè)試劑盒包含稀釋的抗CCI-103F兔抗血清（PAbF6），其中含有0.09%的疊氮鈉和1%的牛血清白蛋白作為穩(wěn)定劑。100毫克和200毫克的試劑盒各含有一個(gè)200微升的抗血清單位；1000毫克的試劑盒含有兩個(gè)200微升的抗血清單位。抗血清的最佳工作稀釋度需由研究者確定，但1/200至1/500的稀釋度在使用過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗血清時(shí)能給出強(qiáng)烈的免疫過氧化物酶染色。

不提供：抗兔二抗試劑或其他免疫組織化學(xué)試劑（緩沖液、抗原修復(fù)劑等）。

儲(chǔ)存：a. 將Hypoxyprobe™-F6存放在室溫下的暗處（也可以存放在2-8攝氏度）。

b. 將兔抗血清（PAbF6）存放在2-8攝氏度。

Hypoxyprobe-F6 (CCI-103F)檢測(cè)說明：

嚙齒動(dòng)物中標(biāo)記物研究始于將CCI-103F溶解在10%二甲基亞砜/90%花生油中，通過靜脈或腹腔注射給藥（參見Ljungkvist等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 62(4): 1157-1168, 2005），劑量為每公斤體重60毫克。六十至一百二十分鐘后，收獲感興趣的組織。CCI-103F的劑量為每公斤體重60毫克，在摩爾基礎(chǔ)上比Hypoxyprobe提供的另一種缺氧標(biāo)記物匹莫尼達(dá)唑鹽酸鹽的劑量要低，但CCI-103F的血漿半衰期更長(zhǎng)（t1/2 = 90分鐘，而匹莫尼達(dá)唑在小鼠中為25分鐘）。

注射后，Hypoxyprobe™標(biāo)記物分布到所有組織，但只在那些氧濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中與含硫蛋白質(zhì)、肽和氨基酸形成加合物——相當(dāng)于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱。正常的組織，如肝臟、腎臟和皮膚，包含在pO2為10毫米汞柱或以下的細(xì)胞，這些組織將結(jié)合Hypoxyprobe™標(biāo)記物。收獲時(shí)組織中未結(jié)合的Hypoxyprobe™標(biāo)記物將在解剖組織缺氧時(shí)被激活并結(jié)合。然而，與組織在典型實(shí)驗(yàn)期間暴露的量相比，殘留的Hypoxyprobe™標(biāo)記物濃度非常小，因此在組織收獲時(shí)由于殘留的Hypoxyprobe™標(biāo)記物引起的任何非特異性結(jié)合都是不可檢測(cè)的。

圖。比較CCI-103F結(jié)合（F6，右圖）與匹莫尼達(dá)唑結(jié)合（Pimo，左圖）在福爾馬林固定的石蠟包埋犬腫瘤活檢組織切片中的結(jié)合情況。免疫過氧化物酶數(shù)據(jù)顯示，F6結(jié)合與匹莫尼達(dá)唑的結(jié)合非常相似。用于F6和匹莫尼達(dá)唑加合物的兔抗血清不發(fā)生交叉反應(yīng)。這允許獨(dú)立測(cè)量?jī)蓚€(gè)標(biāo)記物的結(jié)合（參見Kleiter等人，Int. J. Radiation Oncol. Biol. Phys. 64(2): 592-602, 2006）。

福爾馬林固定的石蠟包埋組織中CCI-103F結(jié)合的免疫過氧化物酶分析的建議方案。

Kleiter等人，Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 64: 592-602, 2006。

Hypoxyprobe™技術(shù)是穩(wěn)健的，鼓勵(lì)研究者自行進(jìn)行修改。