Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue Kit 組件詳細(xì)說(shuō)明：

Hypoxyprobe™-1是一種取代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱為鹽酸匹莫噻唑，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）；在324 nm處的紫外吸收（在0.9%鹽水中的消光系數(shù)為7020）。自由堿形式的匹莫噻唑分子量為254.3，pKa為8.7，辛醇-水分配系數(shù)為8.5。固體Hypoxyprobe™-1在低光照條件下的室溫存儲(chǔ)兩年，并在4°C下以0.9%鹽水（100 g/liter）存放4.5年，沒有檢測(cè)到降解（UV和HPLC分析）。匹莫噻唑在缺氧細(xì)胞中被還原活化，并與含硫（巰基）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物，這些基團(tuán)存在于蛋白質(zhì)、肽和氨基酸中。太平洋藍(lán)染料-MAb1與這些加合物結(jié)合，允許通過(guò)免疫化學(xué)手段檢測(cè)它們。

Pacific Blue-MAb1是一種染料結(jié)合的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的濃度提供，溶于含1% BSA和0.09%疊D化鈉作為穩(wěn)定劑的PBS中。感興趣的組織可以通過(guò)免疫組化在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟包埋切片上研究，或者在組織解離后進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。注意：太平洋藍(lán)染料-MAb1與匹莫噻唑的蛋白質(zhì)、肽和氨基酸加合物結(jié)合，但在免疫組化過(guò)程中，組織處理會(huì)沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組化缺氧檢測(cè)依賴于缺氧組織中匹莫噻唑的蛋白質(zhì)加合物。

艾美捷Pacific Blue：

貨號(hào)：HPB-Pacific Blue

應(yīng)用：免疫化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞和組織缺氧，包括免疫熒光、免疫過(guò)氧化酶法或流式細(xì)胞術(shù)。該Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋大鼠腫瘤組織中提供強(qiáng)烈的免疫染色，并且背景非常低。

規(guī)格：

a. Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue試劑盒包含100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe™-1（匹莫噻唑鹽酸鹽）。通常，動(dòng)物研究中使用的劑量為60 mg/kg體重。

b. 一小瓶（100 mg和200 mg試劑盒）或兩小瓶（1000 mg試劑盒）含有200微升稀釋的Pacific Blue染料結(jié)合的IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每小瓶包含200微升0.50 mg/ml的Pacific Blue染料-MAb1溶液，稀釋液為含1% BSA和0.09%疊D化鈉的PBS。Pacific Blue染料-MAb1的最佳稀釋度需由研究人員確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度能在大鼠腫瘤組織中產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫熒光染色。Pacific Blue染料-MAb1專為免疫熒光設(shè)計(jì)，能夠在熒光顯微鏡下或用于流式細(xì)胞術(shù)和Western Blotting應(yīng)用中觀察。免疫熒光中的抗體稀釋度通常低于免疫過(guò)氧化酶檢測(cè)系統(tǒng)中使用的稀釋度。

不提供：

用于免疫組化分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑。

存儲(chǔ)：

a. 將Hypoxyprobe™-1固體存放在室溫下避光保存（也可在2-8攝氏度下避光存放）。

b. 將Pacific Blue染料-MAb存放在2-8攝氏度避光保存。切勿冷凍。

Hypoxyprobe™-1 Pacific Blue Kit檢測(cè)說(shuō)明：

對(duì)正常或腫瘤組織缺氧的研究始于靜脈注射、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe™-1（鹽酸匹莫噻唑）溶液，劑量為60 mg/kg體重。對(duì)于25克的大鼠，這相當(dāng)于1.5 mg/大鼠。在小鼠中，最高劑量可達(dá)400 mg/kg而無(wú)可檢測(cè)的毒性或組織缺氧變化，但60 mg/kg在成本最小的情況下能夠提供良好的免疫染色。Hypoxyprobe™-1在鹽水中的溶解度為116 mg/ml，因此可使用非常小的體積來(lái)施用Hypoxyprobe™-1。注射或攝入后，Hypoxyprobe™-1分布到所有組織，包括大腦，但僅在氧濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中與含硫的蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于37°C下的部分壓力pO2 = 10 mm Hg。除了腫瘤，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚中也存在pO2 = 10 mmHg或更低的細(xì)胞，這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe™-1。Hypoxyprobe™-1在小鼠中的血漿半衰期約為25分鐘。相比之下， rats的血漿半衰期為45分鐘，犬為90分鐘，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在施用Hypoxyprobe™-1后60分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行采集。在采集時(shí)，組織內(nèi)的Hypoxyprobe™-1將在組織缺氧時(shí)結(jié)合，但與60分鐘或更長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)期間組織暴露的Hypoxyprobe™-1量相比，殘留的Hypoxyprobe™-1量非常小，因此任何由于殘留Hypoxyprobe™-1引起的非特異性結(jié)合都是不可檢測(cè)的。

除了動(dòng)物研究外，Hypoxyprobe™試劑盒也可用于細(xì)胞培養(yǎng)。通常，細(xì)胞懸液在100至200微摩爾的Hypoxyprobe™-1存在下，在缺氧條件下孵育1到2小時(shí)。然后通過(guò)細(xì)胞離心收集細(xì)胞，固定并用太平洋藍(lán)MAb-1進(jìn)行免疫染色。