Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒是一種適用于定量或滴定總抗體的免疫測(cè)定可提取核抗原特異性活性（IgG、IgA和IgM）（ENA）在血清或血漿中。其他生物液體，包括組織培養(yǎng)基）可以被驗(yàn)證使用。

艾美捷Alpha Diagnostic International 小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒（ADI-5210）：

微孔板和所有其他試劑（如果未開(kāi)封）在2-8°C下可穩(wěn)定保存，直到盒子標(biāo)簽上印刷的到期日期為止。工作溶液的穩(wěn)定性在試劑準(zhǔn)備部分有所說(shuō)明。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒特異性：

用于涂覆微孔板的ENA是一種混合了多種可提取抗原的混合物（包括DNA、SSA/Ro、SSB/La、Scl70、Sm、RNP和Jo-1）；小鼠ANA檢測(cè)可能會(huì)檢測(cè)到針對(duì)這些抗原的抗體。ADI提供單獨(dú)的ELISA試劑盒，用于檢測(cè)特定于這些各個(gè)自身抗原的抗體。抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）HRP結(jié)合物與結(jié)合在板上的小鼠IgG、IgA和IgM類(lèi)抗體反應(yīng)。IgE抗體的測(cè)定不會(huì)高于背景信號(hào)。

檢測(cè)靈敏度：

ENA涂覆水平、HRP結(jié)合物濃度和低非特異性結(jié)合樣本稀釋液經(jīng)過(guò)優(yōu)化，以區(qū)分小鼠血清樣本中抗核抗體（ANA）與背景（非抗體）信號(hào)，稀釋比例為1:100。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒檢測(cè)原理：

小鼠ANA總Ig ELISA試劑盒是基于樣本中小鼠ANA IgG、IgA和IgM與固定在微孔板上的ENA結(jié)合的原理，采用抗小鼠IgG+IgA+IgM（H+L）特異性抗體與HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合來(lái)檢測(cè)總ANA抗體。在洗滌步驟后，加入顯色底物（TMB），通過(guò)HRP在底物上的酶促反應(yīng)生成顏色，該顏色的深淺與樣本中ANA Ig的含量成正比。加入終止溶液以終止反應(yīng)，然后使用ELISA微孔讀數(shù)儀測(cè)量450nm處的吸光度。樣本中總小鼠抗體的活性是相對(duì)于小鼠ANA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行計(jì)算的。

樣本采集和處理：

培養(yǎng)基、血清和其他生物液體可以作為樣本，需適當(dāng)稀釋以避免溶液基質(zhì)干擾。對(duì)于血清樣本，通過(guò)靜脈穿刺采集血液，靜置凝固后，室溫離心分離血清。對(duì)于其他樣本，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，在稀釋之前應(yīng)通過(guò)離心和/或過(guò)濾來(lái)澄清樣本。

抗體穩(wěn)定性：

建議將血清初始稀釋到工作樣本稀釋液（WSD）中，以穩(wěn)定抗體活性。這將增強(qiáng)樣本的可重復(fù)性，并在冷藏或冷凍條件下保持抗體活性多年。進(jìn)一步稀釋到低非特異性結(jié)合樣本稀釋液（LNSD），以提供低的檢測(cè)背景，稀釋倍數(shù)至少應(yīng)為初始稀釋的10倍，并應(yīng)在檢測(cè)當(dāng)天進(jìn)行。

Alpha Diagnostic International小鼠ANA（抗核抗體）總Ig ELISA試劑盒結(jié)果計(jì)算：

方法D. 樣本稀釋曲線(xiàn)的滴度

根據(jù)每個(gè)樣本的稀釋曲線(xiàn)計(jì)算出的抗體活性滴度被推薦為最準(zhǔn)確的定量方法。最佳的精確度可以通過(guò)以下指南來(lái)獲得：

使用檢測(cè)中間范圍的OD值指數(shù)（2.0 – 0.5 OD）；這為比較實(shí)驗(yàn)組和重復(fù)實(shí)驗(yàn)提供了最佳的靈敏度和重復(fù)性。通常使用任意的1.0 OD作為標(biāo)準(zhǔn)。

制備每個(gè)樣本的連續(xù)稀釋?zhuān)蕴峁┮幌盗行盘?hào)，這些信號(hào)高于和低于所選的指數(shù)。通過(guò)準(zhǔn)確的稀釋?zhuān)绻總€(gè)樣本運(yùn)行至少4個(gè)稀釋液，則可能不需要重復(fù)。

5倍稀釋方案有助于有效覆蓋一個(gè)范圍，生成高于和低于1.0 OD的OD值。為了獲得更精確的比較數(shù)據(jù)，可以將稀釋方案收緊為3倍或2倍。

可使用中間OD范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)值（例如，200 U/ml）來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化各檢測(cè)間的數(shù)值。

計(jì)算步驟：

在樣本稀釋的逆對(duì)數(shù)坐標(biāo)系上，將每個(gè)陽(yáng)性樣本的兩個(gè)稀釋液的OD值繪制在x軸上，選擇的標(biāo)準(zhǔn)值（任意或選定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）上方和下方的OD值。

從連接這兩個(gè)樣本OD值的點(diǎn)對(duì)點(diǎn)直線(xiàn)中，讀取與所選指數(shù)的OD相對(duì)應(yīng)的稀釋值（x軸）。

= 總Ig抗體活性單位

示例：

使用1.0 OD指數(shù)測(cè)定4種抗體的滴度。

Alpha Diagnostic International（ADI）致力于開(kāi)發(fā)、制造和供應(yīng)新型診斷和質(zhì)量控制試劑及檢測(cè)試劑盒，用于人類(lèi)和動(dòng)物的基礎(chǔ)生物學(xué)和疾病研究。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特約合作代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。