NucleofectorTM技術是一種有效的、非病毒介導的、用于原代細胞與難轉細胞系的轉染方法。

NucleofectorTM技術是一種基于通過施加電脈沖在細胞膜中瞬間產生小孔，綜合各種NucleofectorTM程序和細胞類型特異性電轉試劑，使核酸底物不僅可以輸送到細胞質，還可以通過核膜進入細胞核。這使得細胞最高轉染效率可達99%，并使轉染成功不依賴于細胞的增殖分裂。

NucleofectorTM技術-非病毒介導的方法

圖 1. 使用傳統電穿孔和核轉染法轉染NK細胞系 NKL

用 2.5ug pmaxGFP載體轉染5x106NKL 細胞。核轉染：Nucleofector Solution V；程序 0-017。競爭對手B電穿孔：25 mV，96μF。24小時后通過流式細胞儀監測轉染效率。與通過傳統電穿孔轉染的細胞相比，通過 Nucleofection 轉染的細胞顯示出明顯更好的轉染效率。在轉染后 18 小時測量的細胞活力也優于使用 Nucleofection。

DNA遞送進入細胞核

圖 2. 用 2.5ug TMR 標記的質粒DNA的編碼eGFP轉染正常人真皮成纖維細胞（新生兒）。2 小時后，用 3.5% PFA 固定細胞并通過共聚焦顯微鏡進行分析。TMR 標記顯示在 (A) 中，GFP 熒光顯示在 (B)，DAPI 核染色顯示在 (C) 中，所有三個熒光標記的合并顯示在 (D)。

NucleofectorTM技術的組成

Nucleofector技術由Nucleofector儀器、細胞特異性的緩沖液和操作手冊組成。

儀器∶內置針對各種細胞優化好的電脈沖程序，程序可在儀器觸摸屏上直接選擇。Lonza提供了不同功能模塊平臺，可供大家選擇（X模塊，Y模塊，96孔模塊，LV模塊及384孔模塊）。

試劑盒∶試劑盒是包含有細胞特異性緩沖液，補充劑，專用電極耗材，pmaxGFPIM陽性質粒等。細胞特異性緩沖液和補充劑為細胞轉染提供保護，既保證了高轉染效率與細胞活率，又幫助細胞維持良好的生理功能性狀。我們提供有一系列的優化轉染試劑盒與操作手冊。

數據庫與操作手冊，在我們的數據庫中為大家提供600種以上細胞的轉染數據和操作手冊。優化的操作手冊除了操作指導外，還包括細胞來源、傳代、生長條件、培養基以及轉染后培養等細節技巧。

4D NucleofectorTM 系統提供更加靈活的多模塊

兼容性的模塊：X模塊

針對不同數量級的細胞，提供不同的電極耗材。X模塊可以使用兩種不同形式的聚合材料電極，分別是如下電極杯與電極板條。

*左圖為100uL電極杯；右圖為16-well 20uL電極板條

100uL電極杯

低通量但一次可轉大量細胞（適用于生化應用或Western Blots）

16-well 20uL電極板條

中通量，低細胞數量（報告基因分析，RNAi）

貼壁轉染模塊：Y模塊

至今為止，基于電轉的方法都是要求細胞處于懸浮狀態，NucleofectorTM進入一個新時代，細胞可以在貼壁狀態下直接轉染。維持細胞在貼壁生長生理狀態下完成轉染實驗。細胞培養在24孔板上，插入電極板即可完成轉染。

-轉染前與轉染后都可在24孔板中

-可在細胞生長的任何時期進行轉染

-成活率高，轉染高可達75%

-與CloneticsTM原代動物神經元兼容

中通量轉染模塊：96孔模塊

96-well模塊為一系列原代細胞和細胞系提供靈活的通量以及經濟的處理體系、快速和預先優化的方案。它是4D-Nucleofector設備的中等通量擴展，適用于便捷地優化核轉染條件或作為篩選（CRISPR screening，TCR screen-ing）的一種工具。

-每塊板最多可運行96個獨立程序，在5分鐘內自動處理

-模塊化6×16 Nucleocuvette板可實現可擴展的通量

-可無縫集成到自動化液體處理系統中

-只需1個板即可優化任何難以轉染的細胞

-每個反應的細胞數為104-105個細胞

高通量轉染模塊：384-well系統

384-well Nucleofector系統是一個獨立的平臺，用于384 孔的高通量核轉染。憑借一分鐘的極短的處理時間和高重現性，使它成為篩選應用的理想工具。此外，Nucleofector溶液中的細胞儲存時間被縮至最短，所有現有的96孔Nucleofector方案無需進一步優化即可使用。

快速高效助力篩選

●在一分鐘內處理一個384孔板

高性能與低材料消耗相結合

●轉染細胞數可低至2×104個細胞

易于使用和自動化的系統

●使用現有的96孔NucleofectorTM實驗方案

●由直觀的PC軟件操作

●無縫集成到自動化液體處理系統中

大體積轉染模塊：LV模塊

4D-NucleofectorLV單元，將我們經驗證的4D-Nucleofector系統擴展到更大規模的轉染范圍。

LV單元可以對1×107至1×109個細胞范圍內對人原代細胞進行封閉、可擴展的體外修飾?？梢岳肵單元以較小的規模建立轉染方案，隨后將其轉移到LV單元，而無需重新優化或少量的優化。它支持多種應用，如CAR-T細胞生成、CRISPR 基因組編輯，便于快速將研究成果轉化為符合GMP的細胞療法生產過程。

-封閉的系統-核轉染細胞數量多達109個

-規?？烧嬲糯?以少量樣品建立方法

-成熟的轉染方案-超過700多個優化細胞類型

-操作簡單-極少的培訓需求

-4D-NucleofectorTMLogWare-可使用符合21CFR part 11 的軟件進行操作

-TheraPEAKTM NucleofectorTM耗材-加快滿足GMP過程要求的進度

兩種體系可用于科研或GMP用途

*左圖為1ml電轉盒，最多可容納 1x 108細胞（通過無菌注射端口手動填充）；右圖為20ml電轉盒，處理量高達 20mL（每次1ml），最多可容納 1x 109 個細胞（通過儲液罐或袋子自動填充）

符合21CFR Part 11合規性軟件∶4D-NucleofectorTMLogware

對于4D-NucleofectorTM系統，龍沙提供的附件產品可為上游GMP制造環境中的轉染應用提供更高的質量標準。

-符合Title21CFRPart11/annex11

-用戶管理

-帶有用戶名和密碼的電子簽名

-使用時間戳記錄任何修改、數據創建或用戶交互

-使用失敗描述報告結果失敗

-根據Title21CFRPart11導出數據

-生成審計跟蹤

-無法刪除數據