培養基的滅菌應根據供應商提供的參數或用戶自己的驗證。買來的制備好的培養基應提供其使用的滅菌方法的文件。理想的供應商應提供培養基的滅菌保證水平（SAL），此水平是依靠*的生物指示劑確定的。濕熱高壓滅菌器（高壓蒸汽滅菌器）是的滅菌技術，除了一些為避免培養基中的熱敏物質遭到破壞而采用的煮沸方法。通過過濾滅菌對有些配方也是合適的。
       培養基的滅菌方法、滅菌條件的效果應通過培養基的滅菌和促生長試驗來驗證。另外，如果通過濕熱滅菌，滅菌周期應經過驗證，對選擇合適的負載和體積來確保合適的熱分布。通常供應商建議采用一個已校正過的高壓滅菌鍋，在121°滅菌15分鐘。通常指培養基達到溫度的時間。當高壓滅菌鍋負載結構影響加熱的速度是時，越多的負載就需要越長的滅菌周期。然而，滅菌的時間取決于培養基的體積和高壓鍋的負載。滅菌周期中，當溫度是慢慢上升時，可能導致培養基的過度加熱。因此，必須仔細確認能達到zui小的SAL要求的滅菌周期，在過度加熱時，抑制培養基降解的趨勢。在流體循環完成后，不主張放冷后的培養基中放在高壓滅菌鍋中貯存，因為這樣可能破壞培養基。不合適的加熱或滅菌（對買來的培養基或是內部制備的培養基）可能導致顏色的不同變化，不透明，改變培養基的規格，或是PH發生漂移（與供應商的提議范圍）。
 通過無菌技術為測試制備的每一批培養基其PH在放冷至室溫（25°）后，都應測定。一個扁平的pH計用于培養基表面pH值的測定，浸入式的pH計用于液體的測定。各供應商提供的培養基的pH應該在規定的±0.2的范圍內，除非通過驗證得到更寬的范圍。