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XTerra色譜柱怎么連接到HPLC系統

來源:廣州信譜徠科學儀器有限公司   2024年09月14日 08:46  

XTerra色譜柱怎么連接到HPLC系統

a.色譜柱的連接

需要的工具:3/8英寸扳手和5/16英寸扳手各一個

 

  請避免在硬物上敲擊色譜柱或將色譜柱從高處掉落,這樣可能會造成柱床斷裂,影響柱性能。

 

  使用外徑 1/16英寸的不銹鋼管連接色譜柱,只有不銹鋼管與色譜柱接頭的末端完全吻合,沒有死體積或漏液的情況,才能獲得最好的分離效果。當需要擰緊或擰松色譜柱連接時,請將5/16英寸的扳手置于不銹鋼管的螺絲位置,將3/8英寸的扳手置于色譜柱端口的六面體位置。

  沃特世公司的色譜柱具有ParkerWaters兩種不同型式的接頭,因此與之連接的管路的錐箍也有兩種型式。如圖1所示:Waters型式的接頭要求露出錐箍的不銹鋼管路長度為0.130英寸,而Parker型式的接頭則要求露出錐箍的不銹鋼管路長度為0.090英寸。

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  只有在管路與色譜柱正確連接的系統中,管路與色譜柱接口末端完全吻合,沒有死體積,才能獲得最好的分離效果。

 

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  Parker接頭與Waters型式色譜柱連接會產生死體積,而流路中死體積的存在必然降低色譜柱的柱效。解決這種問題的辦法是:切掉原來的錐箍接頭,用一個新的錐箍連接到管路上做成一個新的接頭。請注意:在擰緊螺絲前,要保證露出錐箍的不銹鋼管路長度和新的色譜柱接口匹配。

 

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  Waters接頭與Parker型式色譜柱連接時,在錐箍與色譜柱接口完全吻合之前,不銹鋼管路就已經頂到了色譜柱接口的末端。這樣,錐箍與色譜柱接口之間會留下縫隙而產生漏液。解決這類問題的方法有兩種:

 

1)用力擰緊不銹鋼管路上的螺絲時錐箍前移與柱接口完全吻合。請注意:用力不可過大以免損壞柱接口或將不銹鋼管擰斷。

 

2)切掉原先的錐箍接頭,將一個新的錐箍連接到管路上做一個新的接頭。

 

  用沃特世公司一件式或兩件式PEEK接頭(PSL613315一件式或PSL613322PSL613316的兩件式接頭)代替傳統的不銹鋼壓緊螺絲可以解決上述兩類問題,因為PEEK接頭允許自由調節露出錐箍之外的不銹鋼管路長度,而且可以手動擰緊,簡單方便。更方便的選擇是使用SLIPFREE連接器,它具有如下特點:

●可將管路推入接口,保證無死體積連接

●手緊后即可耐受10,000 psi壓力

●拆開連接后可以重新適應新的色譜柱接口,與所有商品化的接口兼容

●不銹鋼合金表面穩定性好,且沒有顆粒物質產生

●獨特的設計將固定作用與密封作用分開

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b.測量系統的譜帶擴展體積以及系統偏差

  6說明了管路內徑對系統譜帶擴展和峰形的影響,可以看出,大內徑的連接管路會產生更大的譜帶擴展,靈敏度更低。

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以下將介紹如何測量系統的譜帶擴展體積和系統偏差。

  注意:測試需要在配置單波長紫外檢測器的HPLC系統上進行(不要用二極管矩陣檢測器)

a)取下色譜柱,換上一個零死體積的兩通

b)將泵流速設為1ml/min

c)用流動相將測試混合物稀釋,使檢測器靈敏度達0.5~1AUFS(可使用包含尿嘧啶、對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯的混合物,沃特世訂貨號WAT034544)

d)進樣2~5μL

e)測量4.4%峰高處的峰寬(5-sigma方法):

5-sigma 譜帶擴展體積(μL)=峰寬(min)×流速(ml/min)×(1000μL/1ml)

系統偏差(μL2)= (5-sigma展寬2)/25

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典型的HPLC系統譜帶擴展體積應該在70μL130μL之間(或偏差400μL2±36μL2),對于使用微徑柱(2.1mmI.D.的色譜柱)的系統,譜帶擴展體積不得超過20~40μL(或偏差不得超過16μL2~64μL2)

 

c.測量梯度延遲體積(或滯后體積)

  為了成功地進行梯度方法的轉移,需要在兩臺儀器上用相同的方法測試梯度滯后體積。如下列出了測量梯度滯后體積的方法:

a)取下色譜柱,換上一個零死體積的兩通

b)準備流動相A(純溶劑,如甲醇)和流動相B(流動相A中加入有UV吸收的樣品,如含0.1%(v/v)丙酮的甲醇溶液)

c)用流動相A平衡系統直到基線平穩

d)設定檢測器波長,以待測物的最大吸收為準(丙酮采用265nm)

e)流速設為2mL/min,編輯一個10分鐘內0~100%B的線性梯度(具體的條件可以適當調整,但需要保證梯度體積不低于20mL),然后保持100%B,采集數據f)首先測量50%吸光度處對應的梯度中點時間t1/2(在起始和最終等度區間的基線之間的垂直距離的一半處,如圖8所示)

g)將梯度中點時間t1減去梯度時間t。的一半(本例為5分鐘)即可得到梯度滯后時間t

h)將梯度滯后時間tD乘以流速(2ml/min)即可得到滯后體積VD

 

  提示:對快速梯度方法來講,梯度滯后體積不得超過1mL,如果超過1mL,請參考系統優化建議部分的內容來減小系統體積。


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