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Spherisorb色譜柱連接到HPLC系統的注意事項

來源:廣州信譜徠科學儀器有限公司   2024年09月06日 08:52  

Spherisorb色譜柱連接到HPLC系統的注意事項

A.色譜柱接頭和系統管路注意事項

所有Spherisorb色譜柱都配備沃特世末端接頭。

Spherisorb分析柱所需的工具:

1/2英寸扳手

9/16英寸扳手

Spherisorb小柱所需的工具:

1/4英寸扳手

  小心拿取色譜柱。切勿讓色譜柱掉落或撞擊到堅硬表面,因為這樣會擾亂柱床并且影響色譜柱性能。

 

1. 正確連接接入和接出色譜柱的1/16英寸外徑不銹鋼管路對于獲得高質量色譜結果至關重要。

2. 使用標準不銹鋼壓力螺母接頭時,確保其正確匹配1/16英寸外徑不銹鋼管路非常重要。擰緊或擰松壓力螺母時,將5/16英寸扳手置于壓力螺母上,并將1/2英寸扳手置于色譜柱末端接頭的六角頭上。

  注:在這個過程中,如果任一扳手未正確放在色譜柱管路的搭扳手平面上,都會導致末端接頭松動滲漏。

3. 如果在不銹鋼壓力螺母接頭和色譜柱末端接頭之間出現滲漏,必須組裝新的壓力螺母接頭、管路和錐箍。

4. 色譜柱識別標簽上的箭頭指示了正確的溶劑流向。正確連接接入和接出色譜柱的1/16英寸外徑不銹鋼管路對于獲得高質量色譜結果至關重要。本應成功的分離可能因色譜柱發生額外峰展寬而失敗,認識到這一點非常重要。下文詳細介紹了如何選擇合適的色譜柱接頭和系統管路。由于缺乏行業標準,不同色譜柱制造商使用了不同類型的色譜柱接頭。如果色譜柱末端接頭的類型與現有的管路接頭設置不匹配,可能對色譜分離性能產生負面影響。下文將解釋沃特世和Parker的錐箍及末端接頭之間的差別(1)。不同類型的末端接頭要求管路伸出錐箍的長度不盡相同。Spherisorb色譜柱配備的沃特世末端接頭要求管路伸出錐箍0.130英寸。如果您目前使用的是Parker色譜柱,則在安裝Spherisorb色譜柱前必須重置錐箍深度以獲得理想性能。

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  管路/色譜柱連接正確時(2),管路應接觸到色譜柱末端接頭的底部,二者之間不應有死體積。

image.png

  流路中存在死體積會影響色譜柱性能。如果將Parker錐箍連接至沃特世末端接頭,就可能出現這種情況(3)

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  注:如果將裝有Parker錐箍的管路連接到沃特世色譜柱上,會出現死體積。

  只有一種方法可以解決這個問題:切斷裝有錐箍的管路末端,在管路上安裝新的錐箍并重新連接。在擰緊螺母前,請確保管路接觸到色譜柱末端接頭的底部。相反,如果是將裝有沃特世錐箍的管路連接到帶Parker末端接頭的色譜柱,則管路末端在錐箍到達合適的密封位置之前就會接觸到底部。這會留下空隙并造成滲漏(4)

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  注:如果將沃特世錐箍連接到裝有Parker末端接頭的色譜柱上,會導致滲漏。

 

有兩種方法可以解決這個問題:

1. 進一步擰緊螺母。這樣錐箍會向前移動并到達密封表面。切勿過度擰緊,因為這樣可能會損壞螺母。

2. 切斷管路,更換錐箍并重新連接。

 

B. 盡可能減小譜帶展寬

  5顯示了管路內徑對系統譜帶展寬以及峰形的影響。由圖可見,管路內徑較大會引起峰展寬和靈敏度降低。

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  典型HPLC系統的譜帶展寬體積應為100 μL ± 30 μL(或方差為400 μL2 +/- 36 μL2)。微內徑(內徑2.1 mm)系統的譜帶展寬體積不應超過20~40 μL(或方差不超過16 μL2~64 μL2)

 

C. 測量系統體積

  系統體積對于放大分離非常重要,因為它會在每次運行開始時產生一段等度保持。在小規模分離中,這段等度保持通常是數倍色譜柱體積,但對于制備型分離,等度保持可能只占制備級色譜柱體積的一部分。設計放大實驗時必須考慮補償該體積,以避免色譜峰畸變(7)

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1. 取下色譜柱。

2. 使用乙腈作為流動相A,含0.05 mg/mL尿嘧啶的乙腈作為流動相B(消除無添加劑混合和粘度問題)

3. UV檢測器波長設置為254 nm

4. 在目標儀器上運行初始方法的流速和預期流速。

5. 采集運行100%流動相A時的基線5 min

6. 將梯級設置為5 min后變為100%流動相B,然后繼續采集數據5 min

7. 測量100%流動相A100%流動相B之間的吸光度差值。

8. 測定該吸光度差值的50%處的時間。

9. 計算梯度起點與50%點之間的時間差值。

10. 將時間差值乘以流速。


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