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重組人EGF的制備方式涉及基因工程、蛋白質表達及純化技術。在現代生物工程領域，重組人EGF的制備主要通過大腸桿菌等表達系統實現。這一過程包括基因合成、構建表達載體、轉化宿主細胞、誘導表達以及蛋白純化等關鍵步驟。具體介紹如下：
1.表達系統的選擇和基因合成：
表達系統選擇：常用于生產重組人EGF的表達系統是大腸桿菌（Escherichia coli），這是因為其具有快速生長、操作簡單、成本低廉等特點。
基因合成與克隆：人工合成人EGF基因或者從人類基因組中提取EGF基因，然后將其插入到合適的表達載體中，這些載體通常會引入特定的標簽序列（如His標簽），以便后續的純化工作。
2.融合蛋白的表達及純化：
融合蛋白表達：為了增強EGF的可溶性和簡化純化流程，通常會將EGF基因與某種融合標簽（如SUMO蛋白）結合表達為融合蛋白。這種融合蛋白可以提高目標蛋白的穩定性并降低被宿主細胞內蛋白酶降解的風險。
蛋白純化：利用融合標簽與金屬離子的親和性，通過親和層析方法（例如鎳柱親和層析）來純化融合蛋白。然后通過特定的蛋白酶識別位點將融合標簽與EGF切割分離，從而得到高純度的EGF蛋白。
3.蛋白折疊和活性檢測：
蛋白重新折疊：由于大腸桿菌表達系統缺乏真核生物的蛋白折疊機制，因此重組蛋白通常以包涵體形式存在。需要通過重新折疊的過程，使人EGF恢復其天然構象和生物活性。
活性檢測：采用生物活性測定方法（例如，利用Balb/C 3T3小鼠胚胎成纖維細胞進行細胞增殖試驗）來驗證人EGF的生物活性，確保其具備正常的生物學功能。
4.蛋白的保存和包裝：
保存條件：純化后的重組人EGF一般保存于-20℃以下的環境中，以防止蛋白質降解或失去活性。
產品包裝：根據實際用途進行分裝，并確保全程無菌操作，以免污染。
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