Waters Styragel色譜柱的溶劑和樣品制備

本章介紹了：

■ 溶劑預備

■ 溶劑更換

■ 將色譜柱轉換至高溫溶劑

■ 樣品制備

a. 溶劑預備

使用清潔的溶劑以獲得可重現的結果，同時可免去維護操作。使用LC級或更高級別的溶劑，并過濾除去大于0.45 μm的微粒物質。想獲得過濾器選擇和溶劑相容性一覽表，請參閱沃特世耗材指南的過濾器相關章節。

b. 更換溶劑

溶劑相溶性

Waters Styragel色譜柱的出廠溶劑可由您自選：甲苯、THF或DMF。某些應用要求采用其它溶劑。溶劑轉換時選擇相溶的溶劑能得到最佳效果。請參閱下表了解相溶性溶劑。

對于高溫色譜，要在三氯苯（TCB）或鄰二氯苯（ODCB）等溶劑條件下使用Waters Styragel色譜柱，必須將色譜柱轉換至高溫下所選溶劑。

高溫轉換步驟

將色譜柱組轉換至高溫操作的方法：

1. 在室溫下將系統轉換至色譜柱出廠溶劑。

2. 以0.1 mL/min的流速沖洗節約溶劑型色譜柱，同時在至少3小時內逐漸將溫度升至90 ℃。

溶劑節約型色譜柱（以0.1 mL/min的流速沖洗色譜柱，同時在至少3小時內逐漸將溫度升至90 ℃。）

色譜柱由THF轉換為HFIP或Y-丁內酯時，將系統設置為55 ℃。

3. 在系統處于90 ℃時，以0.1 mL/min流速將其轉換至高溫溶劑，每根色譜柱使用12 mL溶劑。然后以0.2 mL/min流速、至少四倍柱體積的溶劑沖洗系統。

使用色譜柱組時，溶劑用量為上述步驟中指定的色譜柱體積乘以使用的色譜柱數目。

4. 以0.1 mL/min的流速轉換至高溫溶劑。每根色譜柱使用至少20 mL溶劑。

5. 在至少4小時內將溫度升至最終條件，同時繼續以0.1 mL/min的流速沖洗色譜柱。溫度不得超過150 ℃。

在至少4小時內將溫度升至最終條件，同時繼續以0.1 mL/min的流速沖洗色譜柱。溫度不得超過150 ℃。

6. 將流速調節為最終操作條件。最佳流速為0.3 mL/min。

將流速調節為最終操作條件。最佳流速為0.3 mL/min。

返回至室溫

反向執行上述步驟可使色譜柱返回至室溫。或者，將流速設置為0.1 mL/min，并使溫度每30分鐘降低10 ℃。

重啟色譜柱

要重啟色譜柱，將流速維持在0.1 mL/min，并在10小時內將溫度升至所需溫度。然后設置所需的操作流速。

為獲得最長的色譜柱壽命，應避免溫度循環變化。色譜柱未使用時，應維持在運行溫度，并將流速降低至0.1 mL/min。

c. 樣品制備

良好的樣品前處理能夠延長色譜柱壽命并確保獲得可重現的結果。制備樣品時應將色譜柱容量、樣品粘度、檢測器類型和靈敏度等因素考慮在內。采用0.45 μm過濾器除去微粒。參閱沃特世耗材指南過濾器相關章節，獲得過濾器選擇和溶劑相容性信息。

活性聚合物

某些活性聚合物（例如環氧聚合物）能“活化”色譜柱。特定類別的活性聚合物能夠延長色譜柱壽命并提高重現性。

樣品濃度

樣品濃度對粘度和進樣體積均有影響。較小的樣品量能夠得到較窄的色譜峰，但對于粘性樣品可能需要更多用量且稀釋度更高。表2列出了為獲得最佳結果的推薦樣品濃度。

高分子量聚合物

高分子量聚合物尤其容易產生粘度問題。分析高分子量聚合物時，請使用表2所列的濃度。運行窄分布聚合物（例如聚苯乙烯標準品）時，每根色譜柱的進樣體積為50 μL（對于溶劑高效色譜柱，每根色譜柱的進樣體積為20 μL），樣品濃度為0.02%。

由于溶液剪切作用，分子量為四百萬甚至更高的聚苯乙烯標準品極易發生降解。剪切效應表現為分子量分布寬于預期值。操作得當時，可以成功處理分子量高達2000萬的聚合物。

超高分子量聚合物

剪切效應也是大多數超高分子量聚合物所應當考慮的因素。這些聚合物的剪切效應可能不如窄分子量標準品的剪切效應那樣容易觀察。超高分子量的聚烯烴餾分易發生剪切和初始沉淀現象。對于這些餾分，采用極稀的溶液（例如，0.02%）能夠最大限度減少沉淀現象。