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保留時間變來變去怎么辦?

來源:島津企業管理(中國)有限公司   2024年07月31日 13:32  

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液相色譜分析的關鍵因素之一便是保留時間的重現性,今天我們就來簡單的聊聊它的一些小問題。

 

Part 01

首先我們來看幾個定義

 

A 保留時間(Rt):

被分離樣品組分從進樣開始到柱后出現該組分濃度極大值時的時間,也即從進樣開始到出現某組分色譜峰的頂點時為止所經歷的時間。

圖表

描述已自動生成 

 

B 死時間(t):

不與固定相作用的組分的保留時間,即分配系數為0的組分的保留時間稱為死時間。

 

C 折合保留時間(Rt'):

扣除死時間后的保留時間,某組分由于溶解(或者吸附)于固定相,比不溶解(或者不吸附)的組分在柱中多停留的時間又稱為調整保留時間。

 

在實驗室條件下(溫度、色譜柱等)一定時,折合保留時間僅決定于組分的性質,因此折合保留時間是定性的基本參數。

 

Part 02

異常問題,需排查的幾個方面:

 

若保留時間總是改變,那么這是屬于異常問題,可以從多個方面去排查原因。

保留時間的改變一般是分為兩種不同的情況

即保留時間總是沿單方向發生變化(時間或延長或縮短)和保留時間無規律的左右波動。將此兩種情況區分開來對待可以更好地理清解決問題的思路。例如:色譜柱性能下降的時候,很少會導致保留時間無規律的左右波動,而是引起保留時間沿單方向發生變化。

 

A 排除實驗室誤差:

實驗室環境條件是否合適穩定(室溫變化小于2度),玻璃器皿是否干凈無污染,是否存在人為失誤,偶然誤差等。

 

B 流動相排查:

關注流動相的有效期,流動相組分是否有可能揮發變化(封口膜),流動相平衡時間是否充足(梯度洗脫未回到初始流動相濃度或時間不夠),流動相PH值是否合適(緩沖能力、樣品影響),管路是否被污染,管路有沒有氣泡,管路是否有漏液(密封墊漏液、排液閥沒擰緊等),比例閥工作是否正常(注意純有機試劑與高鹽流動相混合的方法)。

 

C 色譜柱的問題(色譜柱性能下降或者被污染):

性能下降:色譜柱上鍵合的配體有機長鏈的穩定性是有一定壽命的,即使在合適的PH范圍內(常見的硅膠基質的色譜柱在pH4左右時比較合適)。長期使用后,固定相也會慢慢水解;即使經常沖洗色譜柱亦會累計色譜柱的水解。

 

色譜柱被污染:色譜柱是具有吸附性的,流動相帶過來的任何污染會累積到色譜柱上面,如流動相瓶/流動相,儀器密封墊碎屑,以及樣品等等。特別要注意的是水,是很容易被污染的流動相,少量污染物可能最終慢慢富集到色譜柱上,從而引起問題,樣品有時候也是污染的一大來源,特別是基質復雜的樣品,例如血樣,蛋白樣等。

 

減少污染的方法,最好是把問題處理在前面,它比污染后的清洗更快捷有效,過濾流動相和樣品以及使用預保護柱是比較不錯的選擇。

 

因此,在進行生物樣品、農產樣品、水產樣品、天然藥物等復雜基質的樣品分析時, 為防止大量基質進入色譜柱造成污染和損傷,使用保護柱是可行的方法之一,島津提供的保護柱工具包都包含相應的柱芯和一個柱套連接器,并可以提供復雜基質樣品保護柱再生系統升級方案,以滿足長期使用的需求,優化實驗室效率。

 

D 液相的泵也有可能存在問題:

輸液是否正常,流量是否準確,壓力是否穩定。

 

這些都是日常作為儀器性能判斷的標準,定期的做儀器性能測試以及儀器的維護保養是預防問題發生的好幫手。

 

分析儀器是由精密零部件組成的精密機械,長時間運轉帶來的磨損、腐蝕會造成儀器功能不全和性能下降。這些問題可能正在實驗室里發生,也對工作效率和儀器壽命產生影響。因此采取積極的應對措施至關重要!

 

維護保養服務為儀器進行專門的清潔、校正、潤滑和測試,同時更換易損耗部品。通過嚴謹科學的程序使儀器達到最佳狀態,幫助用戶獲得準確穩定的分析結果,最大限度的減少計劃外停機,提升工作效率。

 

 

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