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BC0380-丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒
  • BC0380-丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京市通州區馬駒橋鎮聯東U谷中

更新時間:2025-02-23 21:00:08

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丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒由北京索萊寶提供,北京索萊寶提供丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒測定意義,測定原理,使用方式,價格,英文名稱等信息。更多丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒信息請客服咨詢

丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

貨號: BC0380

規格: 50T/48S

 

產品內容:

試劑一:液體60mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體1mL×1 支,-20℃避光保存;

試劑三:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑五:粉劑×1 支,-20℃保存;

試劑六:粉劑×1 支,4℃保存;

試劑七:粉劑×1 支,4℃保存;

 

工作液的配制:臨用前把試劑四、五、六、七轉移到試劑三中混合溶解待用;用不完的試劑 4℃保存一周。

 

產品說明:

     PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是丙酮酸脫氫酶復合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成羥乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循環連接起來。PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),從而導致605nm光吸收的減少。

 

需自備的儀器和用品:

     可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL 比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣本的處理

    稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入1mL 試劑一和 10μL試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4 ℃ 11000 g離心10min,取上清,置冰上待測。

 

二、測定步驟

     1、分光光度計預熱 30min以上,調節波長 605nm,蒸餾水調零。

     2、每個樣本需要900μL工作液,按樣本數加一取出一定量的工作液于37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中孵育5min。

     3、空白管:在1mL比色皿中加入900 µL工作液和50µL水,混勻,立即記錄605nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,計算 ΔA空白=A1-A2。

     4、測定管:在1mL 比色皿中加入900 µL工作液和50µL樣本,混勻,立即記錄 605nm 處初始吸光值A3和1min后的吸光值A4,計算ΔA測定=A3-A4。

 

三、PDH 活性計算

    (1) 按樣本蛋白濃度計算

     單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U /mg prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr)÷T

=904.762×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

    (2) 按樣本鮮重計算

     單位的定義:每g組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

PDH活性(U/g鮮重)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=913.81×(ΔA測定-ΔA空白)÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

     單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

     PDH 活性(U/104 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.828×(ΔA測定-ΔA空白)

     V 反總:反應體系總體積,9.5×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,2.1×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。

 

注意事項:

1、測定過程中所有樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、測定管的ΔA值在0.01-0.25之間,若測定管的ΔA值大于0.25,需將樣本進行稀釋。 

 

丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

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