RNA HS Assay Kit的工作原理可以通過熒光染料選擇性結合、熒光信號的產生和處理、耐受性與特異性等方面來理解。以下是對工作原理的具體分析:
1.熒光染料選擇性結合:
Kit使用特定的熒光染料,這些染料具有高度選擇性,僅在與RNA結合時才會發出熒光信號。這種選擇性結合確保了該試劑盒能夠準確區分RNA和其他核酸,如DNA。
當熒光染料與RNA結合時,它會經歷一個熒光性質的變化,即熒光增強。這種特性使得檢測變得非常靈敏,即使是低豐度的RNA樣品也能被準確檢測到。
2.熒光信號的產生和處理:
一旦熒光染料與RNA結合,就會發出熒光信號。這些信號通過Qubit熒光計或兼容的熒光檢測設備讀取,并轉化為RNA濃度的數值。
Qubit儀器會計算熒光信號的強度,并將其與預先設定的標準曲線對比,從而得到RNA的精確濃度。此過程僅需約2分鐘即可完成,顯著提高了實驗效率。
3.耐受性與特異性:
RNA HS Assay Kit設計時考慮了實驗中可能遇到的各種污染物,如鹽、溶劑、去污劑等。該試劑盒對這些污染物具有出色的耐受性,不會影響RNA的定量結果。
試劑盒中的熒光染料不僅與RNA特異結合,而且還能區分DNA和RNA。這一點對于需要準確RNA定量的下游應用尤其重要,如cDNA合成和RT-qPCR實驗。
4.靈敏度與動態范圍:
該試劑盒能夠精準定量低至250 pg/μL的RNA樣品,檢測范圍從250 pg/μL到100 ng/μL。這使得它非常適合于低豐度RNA樣本的分析。
相比傳統的紫外吸收法,Qubit RNA HS Assay提供了更高的檢測靈敏度和更寬的定量范圍,可以顯著降低背景噪音,從而實現對稀釋樣品的準確測量。
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