FuGENE SI RNA轉染試劑利用與 DNA 轉染試劑相同的溫和可靠性，FuGENE SI，這是一種為 siRNA 傳遞而設計的創新 RNA 轉染試劑。FuGENE SI 是一種 100% 合成的多組分轉染試劑，專為將 RNA 分子傳遞到真核細胞系而設計。

FuGENE SI轉染試劑是一種多組分試劑，它能與siRNA、miRNA和其他小RNA形成復合物，然后安全高效地將其運輸到真核細胞內。

艾美捷FuGENE SI RNA轉染試劑（#SI-1000）的優勢包括：

在對細胞溫和的同時，提供優質的敲低效率。

在許多常見的細胞類型和難以轉染的細胞系中具有高轉染效率。

細胞毒性z小或無，允許您使用較少的細胞進行工作，并消除了更換培養基的要求。

需要z小的優化。

靈活且快速的協議。

RNA干擾：

FuGENE SI專為將siRNA、miRNA和其他小RNA輸送到常規和難以轉染的細胞系而設計。以10nM的siRNA作為起點。

細胞培養條件：

通過使用經常傳代、增殖良好（好處于對數生長期）、并以一致的密度接種的細胞，z小化轉染效率的變異性。

其他培養基添加劑：

在某些細胞類型中，通常包含在細胞培養基中的抗菌劑（例如，抗生素和殺真菌劑）可能對FuGENE SI轉染試劑的轉染效率產生不利影響。如果可能，z初實驗時排除這些添加劑。一旦建立了高效率的條件，可以在監測您的轉染結果的同時重新添加這些組分。

孵育時間：

將細胞孵育24至72小時。孵育時間的長度取決于siRNA基因靶標、被轉染的細胞類型，以及所使用的下游檢測方法。在此孵育期后，使用適合您系統的檢測方法測量基因或蛋白表達。

附加所需試劑和耗材：

1.) 無菌、無血清的DMEM培養基，無添加劑或補充劑。

2.) siRNA、miRNA或相關的小RNA。

細胞轉染前的準備：

選擇以下選項之一：

選項 1：快速前向協議：

在轉染當天，接種細胞（通常是在傳統協議中細胞接種量的2倍，即在轉染前一天接種細胞）。直接進行轉染。

選項 2：傳統前向協議：

在轉染實驗前一天，用胰蛋白酶處理細胞，調整細胞濃度，并進行接種。將細胞放置在孵化器中過夜。

選項 3：反向（高通量篩選）協議：

按照說明在試劑板中制備FuGENE SI和siRNA復合物，直接將細胞添加到含有復合物的試劑板中（通常是在傳統前向協議中細胞接種量的2倍）。

如何使用FuGENE SI RNA轉染試劑？

概述的協議將生成足夠的主混合液，用于轉染單個35毫米培養皿、6孔板的一個孔、24孔板的五個孔，或96孔板的二十五個孔，比例為推薦起始比例（每個96孔板孔0.3微升FuGENE SI + 1皮摩爾siRNA）。對于進一步的擴展和其他容器尺寸，請參見表1。

1.) 使用前讓FuGENE SI轉染試劑、RNA和培養基調整至室溫。旋渦混合一秒，或倒置FuGENE SI轉染試劑瓶以混合。

2.) 在兩個不同的管中用無血清培養基（無抗生素或殺真菌劑）稀釋FuGENE SI試劑和siRNA：

標記兩個管：1.) “FuGENE SI” 2.) “siRNA”。

管1：通過將7.5微升FuGENE SI吸入117.5微升培養基中，準備125微升稀釋的FuGENE SI。立即輕敲管子或旋渦混合一秒以混合。

管2：通過將2.5微升10微摩爾siRNA吸入122.5微升培養基中，準備125微升200納摩爾siRNA。輕敲管子或旋渦混合以混合。

3.) 形成FuGENE SI和siRNA復合物：

將125微升稀釋的siRNA（管2 “siRNA”）加入到125微升稀釋的FuGENE SI（管1 “FuGENE SI”）中，制成250微升的復合溶液。輕敲管子或旋渦混合一秒以混合。

4.) 孵育siRNA-FuGENE SI復合物：

在室溫下孵育siRNA-FuGENE SI復合物5分鐘（z長可達15分鐘）。

5.) 將siRNA-FuGENE SI復合物加入細胞：

從孵化器中取出培養容器。無需移除生長培養基。以滴加方式將siRNA-FuGENE SI復合物加入細胞。搖動孔板或燒瓶以確保分布到整個板表面。

35毫米容器：加入250微升至孔中（每個孔z終使用量：25皮摩爾siRNA + 7.5微升FuGENE SI）

24孔板：每個孔加入50微升（每個孔z終使用量：5皮摩爾siRNA + 1.5微升FuGENE SI）

96孔板：每個孔加入10微升（每個孔z終使用量：1皮摩爾siRNA + 0.3微升FuGENE SI）

關于向其他容器尺寸添加復合物的數量的詳細信息，請參見表1。

6.) 孵育細胞24-72小時。然后，通過選擇的方法分析轉染的細胞。

注意：

與任何實驗一樣，包括適當的對照。準備未轉染的細胞孔、僅含轉染試劑的細胞孔，以及適當的陽性和陰性檢測對照孔。

siRNA與FuGENE SI的z佳比例，以及添加復合物的z佳總量可能因細胞系、細胞密度、檢測日和基因靶標而異。我們建議在96孔板的每個孔中測試0.1-10.0皮摩爾siRNA和0.15-0.6微升FuGENE SI。

表1：制備各種培養容器尺寸的FuGENESI+siRNA復合物的指南表1強調了各種容器尺寸的起始量，使用1pmol siRNA+0.3ul FuGENE SI建議的96孔培養容器單孔起始量。請注意，這只是一個起點，對于特定的細胞系和應用，可能需要優化siRNA+FuGENESI比例和每孔添加的復合物總量。